人白蛋白ELISA检测试剂盒，覆盖生理至病理浓度，减少稀释误差

人白蛋白ELISA检测试剂盒，覆盖生理至病理浓度，减少稀释误差

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的人白蛋白（Human Albumin）ELISA检测试剂盒（货号：E88-129）为定量检测人白蛋白（Human Albumin）的双抗体夹心酶联免疫吸附测定（Sandwich ELISA）试剂盒。人白蛋白是由ALB基因编码的一种血清蛋白，Uniprot ID为P02768，在维持pH平衡、调节胶体渗透压以及运输脂肪酸、氨基酸、激素等多种化合物中发挥关键生理功能。本试剂盒适用于血清、血浆、脑脊液、乳汁及尿液等多种生物样本中白蛋白浓度的精确测定。

二、技术性能指标

参数 | 规格

检测靶标 | 人白蛋白

反应种属 | 人

检测范围 | 0.69 – 500 ng/ml

适用样本类型 | 血清、血浆、脑脊液、乳汁、尿液

检测方法 | 生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶（Biotinylated-Streptavidin-HRP）

检测类型 | 双抗体夹心ELISA

三、储存与稳定性

储存条件：2 - 8 °C

有效期：自收货之日起6个月

原产地：美国

请按照指定温度保存所有试剂组分，避免反复冻融。首次使用后，未用完的板条应密封返回原包装，与其余试剂一同存放于2-8°C。

四、试剂盒组分

组分名称 | 规格 | 数量

人白蛋白预包被96孔可拆酶标板 | 1块 | 1

人白蛋白标准品（500 ng/管） | 500 ng/管 | 2

人白蛋白检测抗体 | 12 ml | 1瓶

20倍浓缩稀释缓冲液C | 25 ml | 1瓶

HRP溶液A | 12 ml | 1瓶

TMB底物液 | 12 ml | 1瓶

终止液 | 12 ml | 1瓶

20倍浓缩洗涤液 | 50 ml | 1瓶

封板膜 | - | 6张

五、检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。酶标板已预先包被抗人白蛋白捕获抗体。加入样本或标准品后，样品中的人白蛋白与捕获抗体结合。洗板后加入检测抗体，形成“捕获抗体-白蛋白-检测抗体”复合物。检测抗体经生物素标记，随后与链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（HRP）结合。加入TMB底物后，HRP催化底物显色，颜色深度与样本中白蛋白含量呈正比。加入终止液终止反应后，在450 nm波长读取吸光度值，根据标准曲线计算样本中白蛋白浓度。

六、样本收集与处理

1. 血清：使用常规采血管收集全血，室温凝固30分钟后，1000×g离心15分钟，取上层血清。

2. 血浆：使用肝素、EDTA或柠檬酸钠抗凝管收集，1000×g离心15分钟，取上层血浆。

3. 脑脊液：常规腰椎穿刺收集，避免溶血，可直接检测或稀释后检测。

4. 乳汁：收集后10000×g离心10分钟去除脂肪层，取中层清液。

5. 尿液：收集晨尿或随机尿，1000×g离心10分钟去除沉淀。

注意：样本收集后应立即检测，或分装后于-80°C保存，避免反复冻融。检测前将样本恢复至室温，根据预实验结果使用1×稀释缓冲液进行适当稀释，确保读数落在标准曲线范围内。

七、检测步骤（简要）

1. 试剂准备：使用去离子水将20×洗涤液和20×稀释缓冲液C稀释为1×工作液。平衡所有试剂至室温。

2. 加样：每孔加入100 µl标准品或稀释后的样本，覆盖封板膜，室温孵育2小时。

3. 洗板：弃去孔内液体，每孔加入300 µl 1×洗涤液，洗涤4次，在吸水纸上拍干。

4. 加检测抗体：每孔加入100 µl检测抗体，室温孵育1小时。

5. 洗板：重复步骤3。

6. 加HRP溶液：每孔加入100 µl HRP溶液A，室温避光孵育30分钟。

7. 洗板：重复步骤3。

8. 显色：每孔加入100 µl TMB底物液，室温避光孵育15-20分钟。

9. 终止：每孔加入100 µl终止液，轻轻震荡混匀。

10. 读板：30分钟内于450 nm波长测定吸光度。

八、结果计算

以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，使用四参数逻辑斯蒂拟合（4-PL）或线性回归绘制标准曲线。根据样本的吸光度值从标准曲线上计算对应浓度，再乘以稀释倍数即得原始样本中白蛋白含量。

九、性能特征

检测范围：0.69 – 500 ng/ml，可覆盖生理及病理条件下的广泛浓度范围。

灵敏度：最低检测限为0.69 ng/ml。

特异性：抗体特异性识别人白蛋白，与小鼠、大鼠白蛋白无交叉反应。

重复性：批内和批间变异系数（CV）均<10%。

十、注意事项

1. 本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断。

2. 不同批次试剂请勿混用。

3. TMB底物液应避光保存，若出现蓝色表明已污染，请勿使用。

4. 终止液含酸性物质，操作时请佩戴防护手套和护目镜。

5. 实验过程中需使用去离子水或蒸馏水。

抗RNA聚合酶II磷酸化多克隆抗体，可直接用于临床样本及动物模型研究

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的抗RNA聚合酶II磷酸化（Ser2）多克隆抗体（货号：A300-654A）为兔源抗人/小鼠RNA聚合酶II亚基A（POLR2A）C端重复结构域中丝氨酸2磷酸化（Phospho S2）的特异性多克隆抗体。RNA聚合酶II是催化DNA转录为RNA的核心酶复合物，其最大亚基RPB1的C端由高度保守的七肽重复序列（YSPTSPS）串联而成，该区域中Ser2的磷酸化状态与转录延伸、RNA加工及转录偶联修复等关键生物学过程密切相关。本抗体经抗原亲和纯化，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是研究转录调控机制的可靠工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | RNA聚合酶II磷酸化（S2）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 围绕丝氨酸2位点的磷酸化合成肽（对应人POLR2A C端重复序列）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ug/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的磷酸化RNA聚合酶II（S2）特异性表位进行亲和纯化。免疫原为磷酸化合成肽段，其序列对应人RNA聚合酶II（GeneID 5430）C端重复序列（YSPTSPS）中丝氨酸2位点周围的区域。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定，以1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4为基准。

质量保证：每批次抗体均经过严格的功能验证，包括：

Western blot检测人及小鼠细胞裂解液中磷酸化Pol II S2的特异性条带（预测分子量约220 kDa）；

免疫沉淀结合质谱或Western blot验证靶标捕获效率；

免疫组化对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片的染色效价评估。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。

应用 | 推荐稀释度 / 用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 推荐使用3-8% Tris-醋酸凝胶分离。检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以降低重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ug抗体。建议与Protein A/G琼脂糖珠或磁珠配合使用。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:1000 | 对FFPE组织切片，推荐使用pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，切勿冷冻。反复冻融会破坏抗体活性。  

有效期：自收货之日起1年，在指定条件下保存可维持完整效价。  

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。  

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会干扰某些酶偶联检测（如HRP），若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

六、注意事项

1. 研究用途限制：本产品仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

2. 安全操作：叠氮钠为有毒化合物，操作时请佩戴手套及护目镜。叠氮钠在金属管道中可能形成爆炸性叠氮化物，废液处理时请用大量水稀释。

3. 特异性验证：建议在使用新批次抗体时，同时设置磷酸酶处理对照（如λ磷酸酶）或使用非磷酸化肽段竞争实验，以确认信号的特异性。

4. 应用优化：对于不同的样本类型（如组织、细胞系）及实验体系，可能需要进一步滴定最佳抗体稀释度。

七、典型实验结果预期

Western Blot：在人HEK293、HeLa或小鼠NIH/3T3细胞裂解液中，可检测到一条约220 kDa的条带；用RNA聚合酶II抑制剂（如DRB或Flavopiridol）处理细胞后，该条带信号显著减弱。

Immunoprecipitation：6 ug/mg裂解物的用量可有效富集磷酸化Pol II，洗脱产物适用于下游Western blot或质谱鉴定。

IHC：在人扁桃体、睾丸或小鼠脑组织FFPE切片中，可见细胞核特异性着色，尤其在活跃转录区域（如生发中心、神经元核）呈现强阳性。

八、相关产品推荐

二抗 | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶联物

阻断血清 | S100-020 | 正常猪血清，用于IP-Western轻链特异性检测

阳性对照裂解物 | 可单独咨询 | 经PMA或UV处理的人细胞裂解物

抗PBRM1（BAF180）多克隆抗体，同时适用于流式、IHC、IP等实验，一抗多用

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出抗PBRM1（BAF180）多克隆抗体（货号：A301-591A）为兔源抗人/小鼠PBRM1（polybromo 1，又称BAF180）蛋白C端区域（第1639–1689位氨基酸之间）的特异性多克隆抗体。PBRM1是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物中PBAF亚型的核心亚基，含有六个溴结构域（bromodomains），能够识别组蛋白乙酰化信号，在转录调控、DNA损伤应答及细胞周期检查点控制中发挥关键作用。该蛋白已被证实是一种肿瘤抑制因子，其突变在肾癌等多种肿瘤中高频出现。本抗体经抗原亲和纯化，适用于流式细胞术（Flow Cyt）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是研究染色质重塑与肿瘤发生机制的有力工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | PBRM1（polybromo 1）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | Flow Cyt, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人PBRM1第1639位至C端之间的区域（具体表位位于1639-1689位氨基酸）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ug/ml（1 mg/ml）

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09% 叠氮钠

三、产品制备

本抗体采用固相载体固定的PBRM1特异性表位进行亲和纯化。免疫原对应人PBRM1（GenBank登录号AAP34197.1，GeneID 55193）第1639至1689位氨基酸之间的区域，该区域靠近蛋白C端，序列在哺乳动物中高度保守。抗体经亲和层析后，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐用量/稀释度 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ug抗体（即1 mg裂解物加6 ul原液）。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:1000 – 1:5000 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。建议同时进行不含一抗的阴性对照。

Flow Cytometry (Flow Cyt) | 1 ul / 1×10⁶ 细胞 | 细胞先用4%甲醛固定，再用90%甲醇透化。每1×10⁶细胞加入1 ul抗体（即1:1000稀释，假设反应体积100 ul）。建议使用荧光标记二抗（如FITC或Alexa Fluor 488）。

五、背景信息

PBRM1是SWI/SNF-B（PBAF）复合物的专属亚基（区别于含BRD7的BAF复合物）。该复合物利用ATP水解产生的能量滑动或驱逐核小体，促进转录因子与DNA结合，调控基因表达。PBRM1的已知功能包括：

1. 转录共激活/抑制：参与干扰素应答、核激素受体信号通路等。

2. DNA损伤应答：在DNA损伤后，PBRM1促进p21（CDKN1A）的转录，诱导细胞周期停滞，防止损伤基因组复制。

3. 肿瘤抑制：PBRM1基因在透明细胞肾细胞癌（ccRCC） 中的突变频率仅次于VHL，约30-40%的ccRCC存在PBRM1失活突变。此外，在胆管癌、乳腺癌等中也发现其突变或表达下调。

六、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致蛋白聚集和活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释条件下保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制细菌生长。如需进行活细胞实验或无叠氮操作，请通过透析或脱盐柱去除叠氮钠。

七、典型实验结果预期

Western Blot：在HEK293全细胞裂解液中，1:5000稀释抗体可检测到一条约180–200 kDa的条带；在PBRM1敲除细胞中该条带消失。

Immunoprecipitation：使用6 ug抗体/mg裂解物可从HeLa细胞核提取物中捕获PBRM1及其结合蛋白（如BRG1、ARID2等PBAF组分）。

IHC：人肾透明细胞癌组织中PBRM1染色缺失（阴性），而癌旁正常肾小管上皮细胞核强阳性。

Flow Cytometry：固定透化后的Jurkat细胞经1 ul/10⁶细胞染色，流式直方图显示明显的荧光峰右移。

仅限科研使用：不得用于临床诊断、治疗或人体实验。

兔抗Ki-67免疫组化抗体，亲和纯化：灵活适配不同组织类型，节省抗体用量

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔源抗小鼠Ki-67（Mki67）蛋白多克隆抗体（货号：IHC-00375），经抗原亲和纯化，专门优化用于免疫组织化学（IHC）检测。Ki-67是被广泛接受的细胞增殖标志物，在细胞周期的G1、S、G2及M期表达，而在静止期（G0）细胞中完全缺失。该蛋白定位于细胞核，其表达水平与多种肿瘤的增殖指数、分级及预后密切相关。本抗体识别小鼠Ki-67蛋白C端区域的特异性表位，适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片及冰冻切片的增殖细胞检测，是临床前研究及肿瘤模型评估的可靠工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | Ki-67

反应种属 | 小鼠

应用 | IHC（免疫组织化学）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 小鼠Ki-67蛋白第1875–1925位氨基酸之间的区域（参考序列CAA58026.1）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 小鼠

浓度 | 250 ug/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠

注：根据抗体制备记录，该抗体识别的表位精确对应于小鼠Ki-67蛋白第1650–1700位氨基酸（GeneID 17345，蛋白编号CAA58026.1）。不同数据库注释可能存在异构体差异，但本抗体经验证可特异性检测全长Ki-67。

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的小鼠Ki-67特异性表位进行亲和纯化。免疫原为重组蛋白或合成肽段，对应小鼠Ki-67蛋白C端附近区域。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

每批次质控标准：

IHC（FFPE）：对小鼠脾脏、胸腺、小肠或肿瘤组织切片进行染色，应在生发中心、隐窝基底及肿瘤增殖区呈现清晰的核阳性信号，而静息淋巴细胞或上皮细胞阴性。

特异性验证：使用Ki-67敲除组织或抗体预吸附实验确认信号特异性。

批次间一致性：通过对照组织切片的染色强度及阳性率进行比对。

四、推荐应用与实验条件

本抗体经优化主要用于免疫组织化学检测。以下为推荐的起始条件：

应用 | 推荐稀释度 | 备注

IHC（福尔马林固定石蜡包埋切片） | 1:100 – 1:500 | 必须进行抗原修复。推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复，可显著增强染色信号。也可试用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），但效果可能略逊。

IHC（冰冻切片） | 1:100 – 1:500 | 切片固定后（如4%甲醛或丙酮）可直接染色；抗原修复通常非必需，但可尝试温和修复。

注意 | - | 在某些样本或实验体系中，抗体可进一步稀释至1:1000以上，建议使用者进行梯度滴定优化。

五、背景信息

Ki-67是一种高分子量核蛋白（小鼠Ki-67分子量约320–360 kDa，由于高度重复序列及磷酸化，电泳迁移率异常），其表达严格与细胞周期偶联：

细胞周期依赖性表达：在G0期完全缺失；G1早期开始出现，S期和G2期逐渐累积，M期达到峰值；有丝分裂结束后迅速降解。因此，Ki-67阳性率直接反映细胞群体的增殖分数。

亚细胞定位动态变化：在间期定位于核仁及核基质；在M期，与染色体表面结合，参与维持染色体外周结构。

分子功能：虽然具体生化活性尚未完全阐明，但研究表明Ki-67参与：

核仁结构的组织与维持；

异染色质与常染色质边界的划定；

有丝分裂期间核膜重建的调控；

核糖体RNA合成（与核仁纤维中心相关）。

研究及诊断价值：

Ki-67是组织病理学中最经典的增殖标志物，具有以下应用：

肿瘤分级与预后判断：在乳腺癌、淋巴瘤、胶质瘤、肺癌等多种人类肿瘤中，Ki-67增殖指数（阳性细胞百分比）与肿瘤恶性程度、转移风险及患者生存期呈显著相关。本抗体虽针对小鼠，但广泛用于人源肿瘤异种移植模型（PDX、CDX） 中评估人肿瘤细胞增殖活性。

药物疗效评估：在肿瘤学临床前研究中，通过比较治疗组与对照组的Ki-67阳性率，可快速评价抗增殖药物的效应。

正常组织增殖区定位：用于识别小肠隐窝、皮肤基底层、生发中心、胚胎组织等增殖活跃区域。

六、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集及非特异性背景升高。

有效期：自收货之日起1年，在未稀释、2-8°C避光保存条件下可维持完整效价。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

七、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。本抗体针对小鼠抗原，不保证对人Ki-67的交叉反应，若需检测人样本，请选择人反应性产品。

2. 抗原修复至关重要：对于FFPE切片，必须进行热诱导抗原修复，否则染色信号极弱或完全阴性。推荐优先尝试Tris-EDTA pH 9.0缓冲液。

3. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液请按有害物处理。

4. 对照设置：每次IHC实验必须设置阴性对照（以同浓度兔IgG或抗体稀释液替代一抗）及阳性对照（已知高增殖小鼠组织，如小肠或脾脏生发中心）。

5. 稀释优化：不同固定时间、组织类型及检测系统可能导致最佳稀释度差异，建议进行预实验梯度滴定（1:100, 1:200, 1:500）。

Bethyl 兔抗HIF1-α抗体，亲和纯化，精准检测缺氧稳定型全长蛋白，避免假阴性

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的Bethyl 兔抗HIF1-α抗体，亲和纯化

（货号：A300-286A）为兔源抗人/小鼠HIF-1α（hypoxia-inducible factor 1-alpha）蛋白C端区域（第775–826位氨基酸之间）的特异性多克隆抗体。HIF-1α是细胞应对低氧环境的核心转录因子，与HIF-1β形成异源二聚体，激活数百种靶基因（如VEGF、EPO、GLUT1等）的表达，参与血管生成、代谢重编程、细胞存活及肿瘤进展。常氧条件下HIF-1α被VHL泛素化降解；缺氧时稳定入核，发挥转录活性。本抗体经抗原亲和纯化，适用于免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是缺氧信号通路研究的关键工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | HIF-1α（缺氧诱导因子1α）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | ICC-IF, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人HIF-1α第776位至C端（第826位）之间的区域（Swiss-Prot Q16665）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ug/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的HIF-1α特异性C端表位进行亲和纯化。免疫原对应人HIF-1α（GeneID 3091，Swiss-Prot Q16665）第775至826位氨基酸区域，该序列在哺乳动物中高度保守，且位于HIF-1α的C端反式激活结构域（C-TAD）内，可有效识别缺氧稳定形式的全长蛋白。抗体经抗原亲和层析后，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

每批次质控标准：

Western blot：在低氧处理（如1% O2、CoCl2或DFO处理）的人HeLa、HEK293或小鼠NIH/3T3细胞裂解液中，检测到约100–120 kDa的特异性条带（HIF-1α分子量约93 kDa，但由于脯氨酸羟基化及磷酸化修饰，电泳迁移率常显示为100–120 kDa）；常氧对照样品条带极弱或缺失。

免疫沉淀：6 ug/mg裂解物可从缺氧细胞核提取物中有效富集HIF-1α，并检测到与HIF-1β的共沉淀。

IHC/ICC-IF：缺氧处理的细胞或肿瘤组织切片呈现核内或核浆聚集性染色，常氧组织背景极低。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ul抗体（1 mg/ml浓度对应6 ug）。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:100 – 1:500 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，必须进行热诱导抗原修复：使用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0），高压锅修复20分钟。也可试用Tris-EDTA（pH 9.0），但pH 6.0效果更佳。

Immunocytochemistry/Immunofluorescence (ICC-IF) | 1:100 – 1:500 | 细胞爬片固定后（推荐4%甲醛），建议进行抗原修复：同上用枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）高压修复20分钟，可显著增强核信号。若不做修复，仅对低氧处理细胞也可能获得信号，但修复可提高一致性。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集和背景升高。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制细菌生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于荧光检测则无影响；如需去除，请使用脱盐柱。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 缺氧诱导是关键：检测HIF-1α蛋白表达时，必须设置缺氧处理组或使用蛋白酶体抑制剂（如MG132），否则常氧下信号极低，易导致假阴性。

3. 样品制备：细胞裂解液中需加入蛋白酶抑制剂混合物及去泛素化酶抑制剂（如NEM），防止HIF-1α降解。推荐在缺氧环境中直接裂解细胞。

4. 抗原修复必需：对于IHC/ICC-IF，石蜡切片或固定细胞必须进行热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0，高压20分钟），否则核信号缺失。

5. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。

6. 对照设置：建议同时检测常氧与缺氧样本，以及使用HIF-1α siRNA敲低或VHL过表达细胞验证抗体特异性。

七、典型实验结果预期

Western Blot：在CoCl2（100 uM，4小时）或低氧（1% O₂，6小时）处理的HeLa细胞裂解液中，1:5000稀释抗体可检测到约110 kDa的清晰条带；常氧对照无条带或极弱。

Immunoprecipitation：从缺氧处理的HEK293核提取物中，6 ug抗体/mg蛋白可沉淀HIF-1α，洗脱物WB检测到预期条带，同时可检测到共沉淀的HIF-1β。

IHC：人肾透明细胞癌（常伴VHL失活，HIF-1α组成性稳定）FFPE切片显示弥漫性核强阳性；癌旁正常肾组织核阴性。

ICC-IF：低氧处理的HeLa细胞呈现明亮的核内点状或均质荧光；常氧细胞仅微弱胞浆背景。

山羊抗小鼠IgG-Fc片段HRP偶联二抗，即开即用，良好匹配HRP检测体系

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为山羊抗小鼠IgG-Fc片段的多克隆抗体（货号：A90-131P），经固相吸附确保类特异性，并通过亲和层析纯化后与辣根过氧化物酶（HRP）共价偶联，酶与抗体的摩尔比为4:1。该抗体特异性识别小鼠IgG分子的Fc区域（重链恒定区），而不与Fab片段或轻链发生交叉反应，同时与IgA、IgM的交叉反应可忽略不计。本品适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织化学（IHC）及免疫印迹（WB）等多种检测技术，是检测或捕获小鼠来源一抗的理想通用二抗试剂。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | 小鼠IgG-Fc片段

反应种属 | 小鼠

应用 | ELISA, ICC, IHC, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

抗体类型 | IgG

偶联物 | HRP（辣根过氧化物酶）

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 小鼠

浓度 | 1 mg/ml

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400

酶/抗体比例：偶联前免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4），最终HRP与IgG摩尔比为4:1，确保高标记效率同时保留抗体结合活性。

三、产品制备与质量控制

本抗体的制备采用多步工艺，确保高特异性与低背景：

1. 免疫与血清采集：使用小鼠IgG-Fc片段作为免疫原免疫山羊，采集抗血清。

2. 固相吸附：抗血清通过固相吸附去除与IgA、IgM及其他血清蛋白交叉反应的组分，确保类特异性。

3. 亲和纯化：将抗原（小鼠IgG-Fc）偶联至琼脂糖凝胶，通过亲和层析分离特异性抗体。

4. HRP偶联：纯化后的抗体与辣根过氧化物酶按优化比例（4:1）共价偶联，经纯化去除游离酶。

5. 质控验证：

免疫电泳：确认抗体仅与小鼠IgG-Fc形成沉淀弧，与IgA、IgM无反应。

ELISA：直接法检测显示对小鼠IgG-Fc的滴度≥1:100,000，对小鼠IgA、IgM的交叉反应<1%。

种属交叉反应测试：可能与其他物种（如大鼠、人）的IgG有轻度交叉，建议在使用前进行预实验验证。

四、推荐应用与实验条件

以下推荐稀释度为起始参考值，不同实验体系（样本类型、一抗浓度、检测灵敏度要求）可能需要进一步优化。

应用 | 推荐稀释度 | 备注

ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于直接或间接ELISA中检测结合的小鼠一抗。建议进行棋盘滴定确定最佳工作浓度。底物推荐TMB或ABTS。

Immunocytochemistry (ICC) | 1:200 – 1:5,000 | 用于细胞爬片或培养细胞的免疫化学染色。固定透化后，孵育小鼠一抗，再以本二抗孵育。DAB或荧光底物均可使用。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:5,000 | 适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）及冰冻组织切片。需注意内源性过氧化物酶的封闭（如3% H2O2）。

Western Blot (WB) | 1:5,000 – 1:50,000 | 用于检测膜上由小鼠一抗识别的蛋白条带。推荐使用5%脱脂牛奶-TBST封闭及稀释抗体，室温孵育1小时或4°C过夜。ECL化学发光检测。

通用操作步骤：

1. 在完成一抗（小鼠来源）孵育并洗涤后，加入适当稀释的本HRP二抗。

2. 室温孵育30–60分钟。

3. 充分洗涤（WB建议3–5次，每次5分钟；IHC/ICC建议3次，每次5分钟；ELISA建议3–5次，每次3分钟）。

4. 加入相应底物显色或化学发光检测。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致酶失活及抗体聚集。

有效期：自收货之日起1年，在未稀释、2-8°C避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后立即存放于2-8°C。

缓冲液成分：含0.2% BSA作为稳定蛋白，0.05% Pro-Clean 400作为防腐剂（替代叠氮钠，因为叠氮钠会抑制HRP活性）。注意：本产品不含叠氮钠，可直接用于HRP检测体系。

避免污染：取用时应使用无菌吸头，避免反复开盖。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 内源性过氧化物酶封闭：在进行IHC/ICC或ELISA时，若样本含有内源性过氧化物酶（如血液、组织中的红细胞），需用0.3–3% H₂O₂处理10–20分钟，否则会产生高背景。

3. 种属交叉反应：本抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应（如大鼠、人）。在涉及多种属样本的实验中，建议设置适当的阴性对照或预吸附。

4. 稀释液选择：建议使用含1% BSA或5%脱脂牛奶的PBS/TBST稀释抗体，避免使用叠氮钠作为防腐剂（会抑制HRP）。

5. 工作液稳定性：稀释后的抗体工作液应在当日使用完毕，不建议反复使用或长期保存。

6. 底物选择：HRP的常用底物包括：

ELISA：TMB（450 nm检测）、ABTS（405 nm）、OPD（492 nm）

WB：ECL化学发光底物

IHC/ICC：DAB（棕色沉淀）、AEC（红色沉淀）

7. 对照设置：每次实验应设置仅加二抗（不加一抗）的阴性对照，以评估非特异性结合。

抗PBEF（NAMPT/Visfatin）多克隆抗体，超宽动态稀释范围，高信噪比，低背景

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为兔源抗人/小鼠PBEF（pre-B-cell colony enhancing factor 1，又称NAMPT或Visfatin）蛋白特异性多克隆抗体（货号：A300-372A）。PBEF是一种多功能蛋白，既可作为细胞因子（visfatin）分泌于细胞外，调节胰岛素信号和血糖代谢，又作为胞内酶——烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT），催化NAD⁺生物合成的限速步骤。PBEF在脂肪组织高度表达，其水平与肥胖、2型糖尿病正相关，同时也参与B细胞分化、炎症应答及细胞存活等过程。本抗体经抗原亲和纯化，识别PBEF蛋白第400–450位氨基酸区域，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是代谢、炎症及肿瘤研究领域的重要工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | PBEF（NAMPT/Visfatin）

反应种属 | 小鼠、人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 人PBEF蛋白第400–450位氨基酸之间的区域（Swiss-Prot P43490）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠

三、产品制备与质量控制

本抗体采用固相载体固定的PBEF特异性表位进行亲和纯化。免疫原对应人PBEF（GeneID 10135，Swiss-Prot P43490）第400至450位氨基酸区域，该序列在人和小鼠之间高度保守。抗体经抗原亲和层析后，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

每批次质控标准：

Western blot：在人HEK293、HeLa或小鼠3T3-L1脂肪细胞裂解液中检测到约55–60 kDa的特异性条带（PBEF分子量约55 kDa）；使用重组PBEF蛋白作为阳性对照。

免疫沉淀：6 µg/mg裂解物可从细胞裂解液中有效富集内源性PBEF，洗脱产物经WB检测信号明确。

免疫组化：对小鼠脂肪组织或人胎盘FFPE切片进行染色，应呈现胞浆及核周阳性信号。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:10,000 – 1:25,000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 µg/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 µl抗体（1 mg/ml浓度对应6 µg）。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:2,000 – 1:10,000 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（高压或微波）。建议进行梯度滴定以确定最佳稀释度。

五、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集及活性丧失。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

六、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 特异性验证：PBEF存在多种翻译后修饰及剪切异构体，建议在实验中使用已知阳性对照（如3T3-L1脂肪细胞裂解液或重组PBEF蛋白）验证抗体识别条带的正确分子量（~55 kDa）。

3. 样品制备：检测分泌型PBEF时，需收集细胞培养上清并浓缩；检测胞内PBEF时，推荐使用RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂）。

4. IHC抗原修复：对FFPE切片，必须进行热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0），否则信号减弱。建议同时进行不含一抗的阴性对照。

5. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。

6. 应用范围：本抗体未经验证用于ELISA或流式细胞术，若需使用请自行优化。

七、相关产品推荐

产品类型 | 货号（示例） | 描述

二抗（WB） | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶联物

二抗（IP-WB） | 轻链特异性 | 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，需配合正常猪血清（S100-020）

阳性对照裂解物 | 可咨询 | 3T3-L1脂肪细胞裂解物或重组PBEF蛋白

阻断肽 | A300-372P | 对应免疫原的竞争肽，用于抗体特异性验证

抗SMC1磷酸化多克隆抗体，精准识别ATM/ATR下游DNA损伤信号

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为兔源抗人SMC1蛋白第966位丝氨酸磷酸化（pS966）的特异性多克隆抗体（货号：A300-050A）。SMC1（structural maintenance of chromosomes 1）是黏连蛋白（cohesin）复合物的核心亚基之一，与SMC3形成异源二聚体，构成环状结构包裹姐妹染色单体，确保有丝分裂和减数分裂中染色体的正确分离。SMC1 Ser966的磷酸化是DNA损伤应答（DDR）中的关键事件，由ATM/ATR激酶介导，参与同源重组修复及细胞周期检查点调控。本抗体经磷酸化表位特异性亲和纯化，适用于免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是研究染色体稳定性、DNA损伤修复及细胞周期调控的核心工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | SMC1磷酸化（Ser966）

反应种属 | 人

应用 | ICC-IF, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 围绕人SMC1第966位丝氨酸的磷酸化合成肽（参考序列NP_006297.2）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ug/ml（1 mg/ml）

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠

三、产品制备

本抗体采用固相载体固定的磷酸化SMC1（Ser966）特异性表位进行亲和纯化。免疫原为磷酸化合成肽段，对应人SMC1（GeneID 8243，蛋白编号NP_006297.2）第966位丝氨酸周围的氨基酸序列。通过亲和层析富集磷酸化特异性抗体，去除非磷酸化反应及非特异性抗体。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2,000 – 1:10,000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ul抗体（1 mg/ml浓度对应6 ug）。推荐与Protein A/G磁珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:1,000 – 1:5,000 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（高压或微波）。

Immunocytochemistry/Immunofluorescence (ICC-IF) | 1:500 – 1:5,000 | 推荐使用4%甲醛固定细胞，然后用0.1–0.5% Triton X-100透化。甲醛固定可保留磷酸化表位，避免使用甲醇（可能破坏抗原）。

DNA损伤诱导建议：为检测SMC1 pS966信号，需对细胞进行DNA损伤处理，常用方案包括：

紫外线（UV）照射：20–50 J/m²，收获前修复1–4小时。

电离辐射（IR）：2–10 Gy，收获前修复1–2小时。

羟基脲（HU）：2 mM，处理16–24小时。

丝裂霉素C（MMC）：0.5 ug/ml，处理24小时。

五、SMC1 pS966的生物学意义

DNA损伤应答标志物：SMC1 Ser966磷酸化是ATM/ATR下游直接事件，其动力学与γH2AX相似，但具有更长的持续信号窗口，适用于检测低剂量辐射或化学损伤。

细胞周期检查点：磷酸化SMC1参与G2/M检查点调控，防止损伤DNA进入有丝分裂。

临床相关性：SMC1A突变导致科妮莉亚·德朗格综合征（Cornelia de Lange syndrome，CdLS2型），表现为多发性发育异常。此外，SMC1A在多种肿瘤中表达异常或突变，影响基因组稳定性。

六、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集及效价下降。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

七、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 磷酸化信号诱导：在常规培养细胞中，SMC1 Ser966磷酸化水平极低。必须对细胞进行DNA损伤处理（如IR、UV、HU或MMC）才能检测到显著信号。未处理细胞可作为阴性对照。

3. 特异性验证：建议使用λ磷酸酶处理细胞裂解物作为对照，确认条带消失；或使用ATM/ATR抑制剂（如KU55933、咖啡因）处理，观察信号减弱。

4. 样品制备：裂解液中必须添加磷酸酶抑制剂（如Na₃VO₄、NaF、β-甘油磷酸）和蛋白酶抑制剂，防止去磷酸化和降解。

5. IHC/ICC-IF注意事项：

甲醛固定可较好保留磷酸化表位，避免使用甲醇固定。

对FFPE切片，热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0）是必需的。

建议同时进行未损伤组织/细胞的阴性对照。

6. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。