兔抗MafA抗体亲和纯化，精准识别胰岛β细胞转录因子

兔抗MafA抗体亲和纯化，精准识别胰岛β细胞转录因子

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对小鼠MafA蛋白的兔源多克隆抗体（货号：A300-611A），经抗原亲和纯化，适用于Western Blot（WB）检测。MafA属于含碱性亮氨酸拉链结构的转录因子家族，在胰岛β细胞中特异性高表达，对胰岛素基因的葡萄糖反应性转录调控具有关键作用。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | MafA

反应性 | 小鼠

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 小鼠MafA蛋白第309位至C末端之间的区域

亚型 | IgG |

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 ug/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于小鼠MafA蛋白第300位至C末端（第359位）之间（参考编号NP_919331.1，GeneID 378435）。该区域对应MafA蛋白的C末端结构域，包含对转录激活功能至关重要的序列。

抗体经固相载体固定化免疫原肽段亲和纯化，免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

四、应用方法

4.1 Western Blot操作流程

封闭与稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜孵育

推荐稀释比例：1:1000 - 1:10,000

二抗推荐：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

4.2 实验要点提示

1. 建议根据目标蛋白表达丰度，在1:1000至1:10,000范围内优化稀释比例

2. 使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液和抗体稀释液

3. 一抗4°C过夜孵育通常可获得最佳信噪比

4. 细胞裂解液样本适用于本抗体检测

五、产品特性说明

5.1 纯度与质量

经抗原亲和纯化处理后，非特异性背景显著降低。每批次抗体均通过质量检测，确保批次间一致性。

5.2 防腐剂说明

缓冲液中含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。注意：叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，若二抗系统为HRP标记，需在实验前通过透析或脱盐柱去除叠氮化钠。

六、生物学功能

MafA是Maf转录因子家族成员，具有碱性亮氨酸拉链结构。该蛋白在胰岛β细胞中特异性富集，主要功能包括：

参与β细胞特异性胰岛素基因转录调控

介导葡萄糖反应性胰岛素基因表达

在胰岛β细胞分化中发挥关键作用

表达模式：

MafA特异性表达于将分化为胰岛β细胞的细胞群中，是β细胞身份维持的重要标志物。

七、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻

保质期：收货后1年内保持活性

避免操作：反复开盖可能导致污染或活性下降，建议分装使用

八、其他名称

Mafa homolog

Pancreatic beta-cell-specific transcriptional activator

RIPE3b1

Transcription factor MafA

V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A

本产品适用于小鼠胰岛β细胞中MafA蛋白的表达检测及相关转录调控研究。

兔抗BRD3亲和纯化抗体，一抗多用省成本

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（货号：A302-368A）为针对人BRD3蛋白的兔源多克隆抗体（Whole IgG格式），经抗原亲和纯化，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。BRD3（含溴结构域蛋白3）是一种双溴结构域核蛋白，参与高乙酰化染色质区域的转录调控，与RNA聚合酶II介导的通过核小体的转录延伸密切相关。此外，BRD3与NUT基因的染色体易位融合蛋白已被证实与一种罕见的致死性癌种相关。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | BRD3

反应性 | 人

宿主 | 兔 

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人BRD3蛋白第676位至C末端之间的区域

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 200 ug/ml

存储条件 | 2 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人BRD3蛋白第676至726位氨基酸残基之间（参考编号NP_031397.1，GeneID 8019）。该区域对应BRD3的C末端结构域，与已知的溴结构域功能相关。

抗体通过固相载体上固定的BRD3特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG轻链HRP结合抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

特别注意：当对免疫沉淀产物进行WB检测时，建议使用抗兔IgG轻链特异性二抗，以避免与IP中使用的抗体重链（约50 kDa）产生交叉反应。添加5%正常猪血清可进一步降低非特异性背景。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 ug 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

该用量经验证可在人细胞裂解液中有效富集BRD3蛋白。实际操作中可根据目标蛋白丰度进行微调，但建议保持总蛋白与抗体比例相对稳定。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:100 1:500

抗原修复 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

操作提示：对于FFPE切片，必须进行充分的抗原修复以暴露表位。柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）微波或高压修复效果已验证。建议同时设置阴性对照（兔IgG或未免疫血清）以评估背景染色。

五、存储与稳定性

存储温度：2 8°C，请勿冷冻。反复冻融会降低抗体活性。

保质期：收货后1年内保持稳定。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB或IHC中直接使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除后再使用。

稳定剂：缓冲液中含0.1% BSA，有助于维持抗体在低浓度下的稳定性，减少非特异性吸附。

六、实验应用建议总结

1. 稀释优化：对于初次使用的样本类型，建议在推荐稀释范围（WB 1:2000-1:10000；IHC 1:100-1:500）内进行梯度实验，以获得最佳信噪比。

2. IP注意事项：6 ug/mg裂解液为起始用量，若目标蛋白丰度较低，可适当增加抗体用量至8-10 ug/mg。

3. IHC关键点：必须使用pH 6.0柠檬酸盐修复液；封闭步骤推荐使用与二抗来源匹配的正常血清（如山羊血清），以避免交叉反应。

4. WB二抗选择：检测细胞裂解液时使用常规抗兔IgG（H+L）即可；检测IP产物时必须使用抗兔IgG轻链特异性二抗，避免重链干扰（约50 kDa处）。

5. 阳性对照：建议使用已知高表达BRD3的人细胞系（如HeLa、HEK293）裂解液作为WB阳性对照；IHC可使用扁桃体或睾丸组织作为阳性对照。

本产品适用于人BRD3蛋白的表达检测、蛋白互作研究（IP-WB联合分析）及组织定位研究（IHC），尤其适用于染色质调控、转录延伸及NUT中线癌相关研究领域。

兔抗RBM9抗体亲和纯化，高特异性识别，多实验场景适配

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对RBM9（RNA结合基序蛋白9，亦称FOX2/RBFOX2）的兔源多克隆抗体（货号：A300-864A），经抗原亲和纯化，适用于流式细胞术（Flow Cyt）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。RBM9是Fox家族前体mRNA剪接调控蛋白的重要成员，在组织特异性可变剪接中发挥开关作用，调控外显子包含/跳跃，同时被鉴定为雌激素受体（ER）的负向协同调节因子。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | RBM9 / FOX2 / RBFOX2

反应性 | 大鼠、小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人RBM9蛋白第1至50位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 ug/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人RBM9蛋白第1至50位氨基酸残基之间（参考编号NP_055124.1，GeneID 23543）。该区域对应RBM9的N末端结构域，包含独特的RNA识别基序（RRM）上游序列，可有效区分RBM9与其他Fox家族成员（如RBM10/FOX3）。

抗体通过固相载体上固定的FOX2/RBM9特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

种属交叉反应性：已验证反应性包括人、小鼠、大鼠，适用于跨物种研究。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG轻链HRP结合抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

操作提示：RBM9在多种组织/细胞中表达水平中等，推荐起始稀释度为1:2000。若信号过强，可上调至1:5000-1:10000。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 ug 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

该用量经验证可在人、小鼠或大鼠细胞裂解液中有效富集RBM9蛋白。建议使用蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠进行捕获。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000（极宽范围，推荐从1:2000起始）

抗原修复 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

操作提示：本抗体在IHC中表现优异，稀释比高达1:10,000，极其经济。建议使用高压或微波修复法，柠檬酸盐pH 6.0为最佳选择。

4.4 流式细胞术（Flow Cytometry）

参数 | 条件

固定与透化 | 4% 甲醛固定，随后用90%甲醇透化

抗体用量 | 0.25 ul / 1 × 10^6 细胞

详细流程：

1. 收集细胞（1×10^6个/样本），用PBS洗涤一次

2. 加入1 mL 4%甲醛，室温固定15分钟

3. PBS洗涤后，加入1 mL 90%预冷甲醇，冰上透化15-30分钟

4. PBS洗涤两次，重悬于含0.25 ul抗体的100 ul孵育缓冲液中，室温避光孵育30-60分钟

5. 洗涤后加入荧光标记二抗，上机检测。

注意事项：甲醇透化步骤对抗原暴露至关重要，不可省略。本用量为经验值，初次实验建议进行滴定（0.1-0.5 ul/10^6细胞）。

五、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 ug/ml）配方在冷藏条件下极为稳定。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB或IHC中直接使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于RNA剪接调控、激素受体信号通路、发育生物学及肿瘤相关研究领域。

兔抗SMARCB1/SNF5抗体亲和纯化，高纯度无杂，靶向特异性强

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的为针对SMARCB1/SNF5（亦称INI1、BAF47）的兔源多克隆抗体（货号：A301-087A），经抗原亲和纯化，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。SMARCB1是人SWI/SNF染色质重塑复合物的核心亚基，在调控基因转录、细胞分化和肿瘤抑制中发挥关键作用。该基因突变或缺失与恶性横纹肌样瘤（MRT）、非典型畸胎样/横纹肌样瘤（AT/RT）等多种恶性肿瘤密切相关。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | SMARCB1 / SNF5 / INI1 / BAF47

反应性 | 小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人SMARCB1蛋白第100至150位氨基酸之间的区域（实际表位位于75-125区间）

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 µg/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人SMARCB1蛋白第75至125位氨基酸残基之间（参考编号NP_003064.2，GeneID 6598）。该区域对应SMARCB1蛋白的N末端结构域，避开了与其它SWI/SNF家族亚基高度同源的区域，确保特异性识别。

抗体通过固相载体上固定的SMARCB1/SNF5特异性表位进行亲和纯化，有效去除非特异性抗体。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

种属交叉反应性：已验证反应性包括人和小鼠，适用于两个物种的样本检测。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB） | 抗兔IgG轻链HRP结合抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

操作提示：SMARCB1在多种细胞系中广泛表达（分子量约44 kDa），推荐起始稀释度为1:2000。若信号过强，可上调至1:5000-1:10000。建议使用HeLa、HEK293或小鼠NIH/3T3细胞裂解液作为阳性对照。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 µg 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

该用量可在人或小鼠细胞裂解液中有效富集SMARCB1及其结合的SWI/SNF复合物。若目的为分析复合物中其他亚基（如BRG1、BRM），建议使用非变性裂解缓冲液。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:1000 - 1:5000

抗原修复 | 推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

操作提示：SMARCB1在正常细胞核中呈均匀强阳性表达，在横纹肌样瘤中因基因缺失而完全丢失。本抗体可有效区分SMARCB1表达正常（核阳性）与完全缺失（核阴性）的样本，是临床诊断AT/RT和MRT的重要工具。建议使用扁桃体或正常脑组织作为阳性对照，横纹肌样瘤组织作为阴性对照。稀释比例可从1:1000起始，根据信号强度上调至1:5000，背景极低。

五、生物学功能

SMARCB1/SNF5/INI1是人SWI/SNF（亦称BAF）染色质重塑复合物的核心核心亚基，主要功能包括：

染色质重塑：作为SWI/SNF复合物的必需组分，利用ATP水解能量重塑核小体结构，调控基因的可及性

转录调控：参与多种发育相关基因、肿瘤抑制基因的转录激活或抑制

细胞周期调控：通过与p53、RB等通路相互作用，控制G1/S检查点

肿瘤抑制：SMARCB1是经典肿瘤抑制基因，双等位基因失活导致横纹肌样瘤易感性

六、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 µg/ml）配方在冷藏条件下极为稳定，避免反复开盖。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测，叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于染色质生物学、肿瘤病理学、表观遗传调控及发育相关研究领域。

兔抗生物素抗体亲和纯化，高特异性结合，低背景无交叉干扰

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品（货号：A150-109A）为针对生物素（Biotin，维生素B7）的兔源多克隆抗体（Whole IgG格式），经抗原亲和纯化，适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组化（IHC）及Western Blot（WB）检测。生物素是哺乳动物代谢中重要的辅酶，在分子生物学领域更被广泛用作标记分子，通过其与链霉亲和素的强亲和力实现信号放大或目标捕获。本抗体可特异性识别生物素标记的蛋白或核酸，是检测生物素化探针、评估标记效率及定位生物素化分子的理想工具。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | 生物素（Biotin，维生素B7）

反应性 | 不适用（针对小分子半抗原）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | Whole IgG

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化（生物素-琼脂糖凝胶）

浓度 | 1 mg/ml |

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后2年

缓冲液 | 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性

3.1 生产流程

本抗体通过使用生物素偶联的琼脂糖凝胶进行亲和层析分离纯化。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

3.2 特异性验证

经免疫电泳和ELISA验证，本抗体与以下抗原特异性反应：

KLH-生物素（钥孔血蓝蛋白-生物素偶联物）

BSA-生物素（牛血清白蛋白-生物素偶联物）

无交叉反应：与游离KLH或游离BSA均无反应。

该特异性验证表明，抗体识别的是生物素分子本身，而非载体蛋白。因此，本抗体可广泛用于检测任何生物素化分子（蛋白、核酸、多糖等），无需考虑载体蛋白类型。

3.3 适用性说明

由于生物素为小分子半抗原，通常需要偶联至载体蛋白才能有效免疫动物。本抗体经亲和纯化后，已去除抗载体蛋白的抗体成分，确保对生物素表位的高特异性识别。

四、应用方法与推荐条件

重要提示：并非所有列出的应用均已由我们的实验室进行过具体验证。以下提供的稀释范围为基于文献及客户反馈的参考起始条件，建议用户在初次使用时进行梯度优化。

4.1 酶联免疫吸附测定（ELISA）

参数 | 推荐条件

检测稀释比 | 1:1000 - 1:30,000

包板稀释比 | 1:100 - 1:500（用于包被生物素化抗原）

操作提示：

作为检测抗体时，建议从1:5000起始进行倍比稀释，选择信噪比最高的稀释度。

用于包被ELISA板时（如固定生物素化BSA），1:100-1:500的稀释度可提供足够的包被密度。

推荐使用含0.05% Tween-20的PBS作为洗涤缓冲液，含1% BSA的PBS作为封闭液和抗体稀释液。

4.2 免疫细胞化学（ICC）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:200 - 1:2000

操作提示：

用于检测细胞表面或胞内生物素化蛋白。若检测胞内靶标，需进行固定和透化处理（推荐4%甲醛固定，0.1% Triton X-100透化）。

建议从1:500起始，根据信号强度调整稀释度。

应设置未生物素化样本作为阴性对照，以排除内源性生物素干扰（某些细胞类型含内源性生物素，可预先用亲和素封闭试剂处理）。

4.3 免疫组化（IHC）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:200 - 1:2000

样本类型 | 福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片或冰冻切片

操作提示：

对于FFPE切片，推荐使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）或EDTA缓冲液（pH 8.0）进行热诱导抗原修复。

内源性生物素在某些组织（如肝脏、肾脏）中丰度较高，建议使用亲和素/生物素封闭试剂盒预处理切片，以消除非特异性染色。

推荐起始稀释度为1:500，根据背景和信号强度向上或向下调整。

4.4 Western Blot（WB）

参数 | 推荐条件

稀释比例 | 1:1000 - 1:30,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST 或 3% BSA-TBST

操作提示：

本抗体可用于检测转印膜上生物素化蛋白（如生物素标记的抗体、生物素化细胞裂解液中的蛋白）。

推荐起始稀释度为1:5000，宽范围（1:1000-1:30,000）允许根据不同样本丰度灵活调整。

必须设置未生物素化的同批次蛋白样本作为阴性对照，以评估背景。

若检测内源性生物素化羧化酶（如乙酰辅酶A羧化酶，分子量约265 kDa），信号可能较强，建议使用更高稀释度（如1:20,000-1:30,000）。

二抗选择：使用HRP或荧光标记的抗兔二抗进行检测。二抗稀释度参照供应商推荐。

五、生物学功能

代谢辅酶：生物素是五种羧化酶（乙酰辅酶A羧化酶、丙酰辅酶A羧化酶、丙酮酸羧化酶、甲基巴豆酰辅酶A羧化酶、甲基丙二酰辅酶A羧化酶）的必需辅因子，参与脂肪酸合成、糖异生和氨基酸代谢。

基因表达调控：通过组蛋白生物素化修饰参与染色质重塑和基因转录调控。

分子生物学应用：

标记与捕获：生物素可与链霉亲和素/亲和素形成极高亲和力（Kd ~10⁻¹⁵ M）的非共价结合，是分子生物学中最常用的亲和标记系统。

生物素化探针：抗体、核酸、小分子均可通过化学偶联引入生物素标签，用于ELISA、Western Blot、免疫组化、Pull-down、流式细胞术等检测。

信号放大：基于生物素-链霉亲和素系统的检测灵敏度远高于直接标记法。

六、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。冷冻可能导致抗体聚集或活性下降。

保质期：收货后2年内保持稳定，优于多数抗体的1年保质期。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测，需注意叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，可通过透析或脱盐柱去除。

缓冲液体系：磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.4），兼容绝大多数免疫检测体系。避免反复开盖，建议分装后长期保存（2-8°C）。

ELISA入门配件试剂盒（含BSA封闭缓冲液），自带BSA封闭液，一站式配齐省时间

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本ELISA入门配件试剂盒（含BSA封闭缓冲液）（货号：E101）为酶联免疫吸附测定实验提供全套基础试剂与耗材，包含高质量微孔板、包被缓冲液、洗涤液、封闭液、表面活性剂及HRP酶底物。所有组件均经过优化设计，适用于建立或优化间接ELISA、夹心ELISA及竞争ELISA等多种检测体系。本套装覆盖ELISA实验从抗原包被到信号检测的全流程，用户仅需准备待测样本、一抗及酶标二抗即可开展实验。

二、组件清单与详细规格

组件名称 | 规格 | 货号/来源 | 存储条件 | 保质期

微孔板（带框架） | 10 × 96孔板 | Nunc 445101 | 室温，防尘防潮 | 1年

ELISA包被缓冲液 | 2胶囊 | Sigma C3041 | 室温 | 1年

ELISA洗涤液 | 5包 | Sigma T9039 | 2-30°C | 1年

ELISA封闭缓冲液 | 1包 | Sigma T6789 | 2-8°C | 1年

10% Tween 20 | 1瓶 | Sigma P7949 | 室温 | 1年 |

TMB底物液 | 2 × 60 ml | — | 2-8°C | 1年

三、各组件的功能与使用说明

3.1 微孔板（Microtiter Wells）

产品信息：Nunc MaxiSorp C形底模块与框架，货号445101，共10块96孔板。MaxiSorp表面经专有处理，具有高亲水性及高蛋白结合能力，适用于被动吸附抗原或抗体。

使用要点：

C形底（平底）设计便于比色读数，尤其适合酶标仪检测。

每孔结合容量约为400-500 ng IgG（取决于蛋白性质）。

拆开包装后未使用的板条应密封保存，避免吸湿。

建议在包被前用无水乙醇或异丙醇清洁表面（非必需步骤）。

存储条件：室温存放，避免灰尘和碎屑污染。请勿暴露于高温或潮湿环境。

3.2 ELISA包被缓冲液（Coating Buffer）

产品信息：碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液胶囊（Sigma C3041），每包2粒。每粒胶囊配制100 ml缓冲液，终浓度为0.05 M碳酸盐-碳酸氢盐，pH 9.6。该pH范围适用于多数蛋白质（如抗体、抗原）的被动吸附。

配制方法：将一粒胶囊内容物溶于100 ml去离子水或蒸馏水中，搅拌至完全溶解。无需调节pH。

使用提示：

包被条件：推荐每孔加入50-100 µl稀释于包被缓冲液中的抗原或抗体，4°C孵育过夜或37°C孵育1-2小时。

包被后需用洗涤液洗板3-5次，再进行封闭步骤。

未使用完的包被液可短期保存于2-8°C（建议1周内使用），但推荐新鲜配制。

3.3 ELISA洗涤液（Wash Solution）

产品信息：50 mM Tris缓冲盐水，pH 8.0，含0.05% Tween 20（Sigma T9039），每包可配制1升工作液。Tris缓冲体系提供稳定的pH环境，Tween 20作为非离子型表面活性剂可有效降低非特异性吸附。

配制方法：将一包内容物溶于900 ml去离子水，搅拌溶解后定容至1升。无需调节pH。

存储条件：配制后的工作液可在2-30°C保存一年，但建议室温（20-25°C）存放以避免低温沉淀。

使用提示：

每孔洗涤量推荐300 µl，每次洗涤静置30-60秒后拍干。

重复洗涤3-5次可有效去除未结合物质。

若发现洗涤液有沉淀，可轻微加热（不超过37°C）溶解后使用。

3.4 ELISA封闭缓冲液（Blocking Buffer）

产品信息：50 mM Tris缓冲盐水，pH 8.0，含1%牛血清白蛋白（BSA）（Sigma T6789），每包配制100 ml工作液。BSA可封闭微孔板上未被包被蛋白占据的空白位点，减少后续抗体的非特异性吸附。

配制方法：将一包内容物溶于90 ml去离子水，搅拌溶解后定容至100 ml。可轻微加热（37°C）辅助溶解。建议无菌过滤（0.22 µm滤膜）后使用。

存储条件：配制后应保存于2-8°C，保质期一年。请勿反复室温放置。

使用提示：

每孔加入200-300 µl封闭液，室温孵育1小时或4°C过夜。

封闭后无需洗涤，直接加入一抗或检测抗体。

若检测系统对BSA敏感（如某些抗BSA抗体），可改用脱脂牛奶或其他封闭剂。

3.5 10% Tween 20溶液

产品信息：10%聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯（Tween 20）水溶液（Sigma P7949）。Tween 20是ELISA洗涤缓冲液中的关键去污剂，可降低背景信号。

使用提示：

用于配制含Tween 20的洗涤缓冲液或抗体稀释液。常见工作浓度为0.05%（即每升缓冲液加入5 ml 10% Tween 20）。

也可直接加入样本稀释液中，减少非特异性吸附。

原液若出现絮状物或沉淀，可轻微加热（不超过40°C）并摇匀后使用。

存储条件：室温保存，避免冻结。有效期一年。

3.6 TMB酶底物（Enzyme Substrate）

产品信息：TMB（四甲基联苯胺）单组分HRP微孔底物液，共2瓶，每瓶60 ml。即开即用，无需稀释或混合。TMB在辣根过氧化物酶（HRP）催化下产生蓝色可溶性产物（λmax = 370 nm或652 nm），加酸终止后变黄（λmax = 450 nm），是最常用的HRP显色底物之一。

使用提示：

使用前将底物平衡至室温（避免冷底物导致反应速率不均）。

每孔加入50-100 µl底物，室温避光孵育5-30分钟（根据信号强度优化时间）。

显色充分后，每孔加入50 µl终止液（如2 M H₂SO₄或1 M HCl），轻轻混匀后读取OD 450 nm。

请勿使用金属器具接触底物，避免氧化污染。

存储条件：严格保存于2-8°C，避免光照。未开封可保存一年，开封后建议在1个月内用完，或分装后冷冻保存（-20°C）。若底物出现蓝色或深蓝色，表明已氧化失效，请勿使用。

四、注意事项与质量控制

1. 交叉污染预防：各组件应独立存放，使用洁净移液器及吸头。Tween 20易起泡，加液时避免产生过多气泡。

2. 内源性酶干扰：若样本中含有内源性过氧化物酶（如血液样本），可在样本稀释液中加入0.1%叠氮化钠或0.01%过氧化氢酶抑制剂，但需注意叠氮化钠会抑制HRP，不可在底物反应前使用。

3. 底物安全：TMB潜在致癌性，操作时应戴手套，避免皮肤接触。

4. 板子保存：包被封闭后的微孔板可干燥密封保存于2-8°C 1-2周，但建议新鲜使用以获得最佳灵敏度。

5. 缓冲液pH：包被缓冲液pH 9.6适用于大多数蛋白，若蛋白等电点极低（pI <5），可改用中性或弱酸性包被缓冲液（如PBS，pH 7.4）。

兔抗BubR1抗体亲和纯化，高纯度助力科研攻坚

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对BubR1（BUB1B，纺锤体检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B）的兔源多克隆抗体（货号：A300-386A），经抗原亲和纯化，适用于免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。BubR1是细胞周期纺锤体检查点（spindle checkpoint）的核心组分，与Bub3、Mad2、Cdc20共同构成有丝分裂检查点复合物（MCC），通过抑制后期促进复合物（APC）确保染色体在赤道板正确排列前不发生分离。BubR1功能异常与染色体不稳定、非整倍体及多种肿瘤发生密切相关。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | BubR1（BUB1B / MAD3L）

反应性 | 大鼠、小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人BubR1蛋白第350至400位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 µg/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

本抗体识别的表位位于人BubR1蛋白第350至400位氨基酸残基之间（参考TrEMBL条目Q8WV50，GeneID 701）。该区域位于BubR1的中间区域，避开了N端的激酶结构域和C端的PP2A结合区域，可特异性识别全长BubR1及其天然构象。

抗体通过固相载体上固定的BubR1特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

种属交叉反应性：已验证反应性包括人、小鼠、大鼠，适用于三个物种的细胞周期研究。经测试，该抗体在人HEK293、HeLa、小鼠NIH/3T3及大鼠NRK细胞裂解液中均可检测到预期大小的BubR1条带（约120 kDa）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:15,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB） | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

操作提示：

BubR1在细胞周期中表达水平随细胞周期进程波动，在G2/M期达到高峰。建议使用同步化至M期的细胞裂解液（如秋水仙胺或诺考达唑处理）作为阳性对照。

推荐起始稀释度为1:2000。若信号过强，可上调至1:5000-1:15000。

预期条带位置：约120 kDa。有时可观察到较低分子量的降解条带（常见于凋亡或老化细胞），属于正常现象。

全细胞裂解液制备时建议添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、蛋白酶抑制剂cocktail），防止BubR1降解。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 µg 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

操作提示：

该用量适用于人、小鼠或大鼠细胞裂解液（总蛋白浓度1-10 mg/ml）。建议使用非变性裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 8.0）以保持蛋白复合物完整性。

免疫沉淀后，对沉淀复合物进行WB检测时，必须使用抗兔IgG轻链HRP结合抗体（而非常规抗兔IgG H+L），以避免IP抗体的重链信号（约50 kDa）干扰目标蛋白检测。同时，在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）可进一步降低非特异性背景。

建议设置同型对照兔IgG作为阴性IP对照，以排除非特异性结合。

4.3 IP-WB联用检测流程

对于分析BubR1与其相互作用蛋白（如Bub3、Mad2、Cdc20）的共免疫沉淀实验，推荐以下步骤：

1. 裂解细胞（每mg总蛋白使用6 µg抗体进行IP）。

2. 孵育后加入蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，4°C旋转孵育2小时或过夜。

3. 洗涤珠子3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸变性。

4. 进行WB检测时，一抗仍使用本抗体（A300-386A），二抗选择抗兔IgG轻链HRP，避免重链信号（约50 kDa）遮挡目标区域。

五、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 µg/ml）配方在冷藏条件下极为稳定。反复开盖取用建议分装保存，避免污染。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB中直接使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。对于IP实验，叠氮化钠通常不影响抗体与蛋白A/G的结合，但若担心干扰，也可在裂解液中不添加额外叠氮化物。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于细胞周期调控、有丝分裂检查点、染色体稳定性及肿瘤生物学等相关研究领域。

兔抗p73抗体亲和纯化，高活性稳定，检测精准可重复

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对人p73蛋白的兔源多克隆抗体（货号：A300-126A），经抗原亲和纯化，适用于免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。p73是p53家族的重要成员，与p53及p63在结构和功能上高度相关，但各自承担独特的生物学角色。p73参与DNA损伤诱导的细胞凋亡应答，并在基因反式激活和生长抑制中发挥关键作用。本抗体特异性识别p73蛋白的N末端区域，可检测除ΔNp73外的多种p73亚型。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | p73（TP73）

反应性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人p73蛋白第1至50位氨基酸之间的区域（实际表位位于1-62）

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 µg/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

3.1 表位定位

本抗体识别的表位位于人p73蛋白第1至62位氨基酸残基之间（参考Swiss-Prot条目O15350，GeneID 7161）。该区域对应p73蛋白的N端转录激活域（Transactivation domain, TAD），是p73发挥转录因子功能的核心结构域。

3.2 亚型识别谱

p73基因通过可变剪接产生多种亚型。经验证，本抗体可识别以下全长亚型：

α、β、γ、δ、ε、ζ、κ 亚型

不识别：ΔNp73（N末端截短亚型，缺乏转录激活域）。这一特性使本抗体成为区分全长p73与显性负性抑制亚型ΔNp73的理想工具。

3.3 特异性说明

抗体通过固相载体上固定的p73特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

预期交叉反应：基于序列同源性分析，本抗体不与p53或p63发生交叉反应。建议用户在使用时设置相应的阴性对照以验证。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗 | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

操作提示：

阳性对照：推荐使用人细胞系裂解液，如HCT116（p53野生型，p73表达水平中等）、SJSA-1或U2OS。DNA损伤剂（如阿霉素、依托泊苷、顺铂）处理可诱导p73表达上调。

预期条带：全长p73α亚型分子量约为73-75 kDa；其他亚型因剪接差异分子量有所不同（β约68 kDa，γ约55 kDa等）。有时可观察到多条带，代表不同亚型或磷酸化修饰形式。

起始稀释度：建议从1:2000开始，根据信号强度优化至1:5000-1:10000。

样品制备：使用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。p73为核蛋白，建议进行核质分离或使用超声辅助裂解以提高提取效率。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 µg 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

操作提示：

使用非变性裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4）以保持蛋白-蛋白相互作用。

每mg总蛋白加入6 µg抗体，4°C旋转孵育2-4小时或过夜。

加入蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，继续孵育1-2小时。

洗涤3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸变性。

IP产物WB检测的特殊要求：当对免疫沉淀复合物进行WB分析时，必须使用抗兔IgG轻链HRP结合抗体（而非普通抗兔IgG H+L），以避免IP抗体的重链信号（约50 kDa）干扰目标蛋白检测。同时，在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）可进一步降低非特异性背景。

4.3 功能研究应用

由于本抗体识别N端转录激活域，可用于：

检测全长p73与ΔNp73的比例：结合特异性识别ΔNp73的抗体（如C端抗体）进行平行分析。

分析p73的转录激活活性：通过ChIP-qPCR或报告基因实验联合使用。

研究p73与p53的协同作用：在DNA损伤应答中，p73可补偿p53功能缺失。

五、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 µg/ml）配方在冷藏条件下极为稳定。若长期不使用，可分装后保存于-20°C或-80°C，但需避免反复冻融。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB中使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。对于IP实验，叠氮化钠通常不影响抗体与蛋白A/G的结合。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于p53家族生物学、DNA损伤应答、细胞凋亡机制及肿瘤耐药性等相关研究领域。