必拓生物重组蛋白制备服务(原核表达系统)

必拓生物重组蛋白制备服务(原核表达系统)

必拓生物技术团队可以帮助客户进行检测抗原、免疫用抗原、细胞因子、单链抗体、纳米抗体、信号通路蛋白、病毒样颗粒蛋白（VLP）等“从基因到蛋白”的一站式开发和制备工作。利用原核系统进行重组蛋白的研发和生产是公司的优势之一，技术团队常年从事重组蛋白的开发工作，曾承担国家“863”计划“原核表达系统的研究及应用”课题。公司每年为客户提供200多种重组蛋白定制服务。

 
(一) 基因设计及合成 

必拓生物为客户提供密码子、GC含量和特殊基因序列的优化等基因设计工作，能提高转录和翻译效率，提高mRNA稳定性。
 

(二) 载体构建

必拓生物有如pET21a（+），pET28a(+)、pGEX系列、pMAL系列等三十多种成熟原核表达载体可供选择，有十多种自主优化构建的特色载体，这些载体分别具有提高表达量、促进分泌表达、促进可溶表达、促进二硫键形成等特征。并可针对目的蛋白性质、制备工艺要求以及大肠杆菌系统的特点，优化基因序列和载体构建，以求得到最优的表达系统等。在构建表达载体时主要通过以下几方面进行优化：

1）启动子的选择，提供强启动子、中强启动子及弱启动子的选择；
2）信号肽的选择，提供多种不同分泌机制的信号肽供选择，找到最优的表达信号肽；
3）促表达伴侣分子的选择，有多种促可溶表达分子伴侣、促二硫键形成分子伴侣、促折叠分子伴侣可供选择；
4）纯化标签的选择，为方便纯化制备，提供多种亲和纯化标签供选择，如His6标签、GST标签、MBP标签、Strep标签等。
 

(三) 表达菌株建立及小量诱导表达

必拓生物拥有BL21(DE3)、BLR(DE3)、BL21(DE3) Star、Origami B(DE3) 、C43(DE3)、Rosetta 2(DE3)、M15等十多种表达宿主菌可供选择，主要从增强质粒稳定性、提高表达量、促进含稀有密码子基因的表达、提供胞内蛋白二硫键形成环境、促进毒性蛋白表达等方面进行表达菌株的选择，并进行小量诱导表达和检测。
 

(四) 重组蛋白大规模表达工艺优化

必拓生物可以为客户提供3L、10L、50L等不同量级的蛋白发酵工艺的优化，主要从培养方式、培养基配制、培养液pH、培养温度、培养时间等多个角度入手，对重组蛋白的大规模表达工艺进行优化。
 

(五) 蛋白复性

必拓生物综合现有各类复性方法，优化出若干类针对不同重组蛋白的方法，分别复性不同蛋白，达到使每种重组蛋白都获得较高复性效率的目的。这些优化的方面包括：

a）缓冲体系的选择，包括缓冲盐的种类和浓度、pH值等；
b）盐离子种类和强度的选择；
c）氧化还原对的选择，这个需要参考重组蛋白的二硫键含量情况；
d）聚集抑制剂和复性促进剂的选择。有多种化学试剂可以用来抑制蛋白聚集和促进复性，复性重组蛋白时可以针对性选用。
 

(六) 蛋白纯化

必拓生物建有完善的“层析介质研发和生产平台”，具备成熟的离子层析介质和亲和层析介质制备经验和产品，可以进行多样化的蛋白纯化方法选择和优化。必拓生物根据客户需求，可为客户制备出纯度达到90%-98%重组蛋白。公司拥有先进的AKTA Explorer、AKTA Prime系统和全套离子层析及亲和层析介质预装柱，保障蛋白纯化工作的高效运行。
 

(七) 内毒素控制与去除

系统表达的蛋白产品会夹带大量内毒素残留，其主要来源为大肠杆菌细胞壁成分脂多糖。内毒素因为其本身异质性，分子大小不一、疏水性很强、带很强负电荷，往往与目的蛋白结合在一起，极不易分开，所以去除起来很困难，迄今并无很好的方法。必拓生物通过全流程控制和针对性去除相结合的方法控制残留水平，最终将产品内毒素水平控制在小于1EU/μg甚至小于0.1EU/μg。
 

(八) 蛋白鉴定

必拓生物熟练掌握SDS-PAGE、蛋白浓度检测、western blot、流式细胞术等定性或者定量分析的方法进行重组蛋白鉴定。


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必拓生物其它定制服务

1.重组蛋白定制服务(大肠杆菌表达系统)
2.重组蛋白纯化，抗体纯化服务
3.重组蛋白OEM生产服务(GMP条件)
4.高纯度多克隆抗体定制服务