钙离子荧光探针Cal-520, 钾盐

	货号	21140	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10x50 ug
	Ex (nm)	493	Em (nm)	515
	分子量	921.08	溶剂	Water
	产品详细介绍

产品概述

 百萤生物为您提供优质的钙离子荧光探针Cal-520, 钾盐在细胞内的水解产物，能选择性结合钙离子，其荧光强度与钙离子浓度呈高度正相关 。Cal-520 ，Cal-590 和Cal-630 提供大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。它们是荧光钙敏感染料，Cal-520? AM 是一种新型荧光钙离子探针，为检测细胞内钙离子动员提供了高效均质的荧光检测方案。与绿色钙离子指示剂（如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM）相比，其信噪比和细胞内保留性显著提升。钙离子荧光探针Cal-520, 钾盐 该染料可穿透细胞膜，与Ca2?结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度 。

百萤生物公司简介

西安百萤生物科技有限公司是一家专注从事生物、化学试剂及其试剂盒；主要以荧光探针，分子探针，核酸/蛋白质标记、细胞

检测等技术和产品为研发核心，产品应用于基因合成、细胞检测、活体示踪，抗体标记、新药筛选等领域。

AAT Bioquest公司长年以来与百萤生物互补优势，为国内外广大用户提供光谱检测，底物显色，荧光发光技术等全系列解决方

案。近年来，百萤生物以严苛的品控标准已与多家药企、CRO公司、众多高校及科研单位建立了长期稳定的合作关系；我们的服

务宗旨：为广大科研用户提供好的服务.

1、高品质保障和性价比高的产品。

2、低的价格和灵活多样的包装规格选择。

3、每周都有发货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所

需产品，百萤生物给您优惠的折扣和专业的技术支持，满足不同实验的需求。我们将一如既往的为客户和代理商提供售后保障

注：本公司的所有产品可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其它非科研用途！

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic?F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic?F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。