IBL-人淀粉样蛋白β（1-38）（FL）检测试剂盒的实验设计与优化

IBL-人淀粉样蛋白β（1-38）（FL）检测试剂盒的实验设计与优化

本ELISA试剂盒可检测完整保留N末端的人类Aβ (1-38)。

如需检测完整保留N末端的人类Aβ (1-42)，请使用IBL编号27712：Human Amyloidβ (1-42) (N) Assay Kit。

如需检测包括因各种原因在N末端发生切割的Aβ (1-42)变体，请使用IBL编号27711：Human Amyloidβ (1-42) Assay Kit。

IBL编号27718的Human Amyloidβ (1-40) (FL) Assay Kit和IBL编号27714的Human Amyloidβ (1-40) (N) Assay Kit分别用于检测完整保留N末端的Aβ (1-40)。

其中，Human Amyloidβ (1-40) (FL) Assay Kit使用的是单克隆抗体作为标记抗体，而Human Amyloidβ (1-40) (N) Assay Kit使用的是多克隆抗体。

如需检测包括N末端发生切割的Aβ (1-40)变体，请使用IBL编号27713：Human Amyloidβ (1-40) Assay Kit。

此外，IBL编号27729的Human Amyloidβ (1-x) Assay Kit可同时检测Aβ (1-38)、Aβ (1-40)、Aβ (1-42)和Aβ (1-43)等多种变体。

因此，分别检测Aβ (1-38)、Aβ (1-40)和Aβ (1-42)对于阿尔茨海默病的研究具有重要意义。

艾美捷IBL-人淀粉样蛋白β（1-38）（FL）检测试剂盒：

货号：27717-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：人类

检测样本类型：脑脊液（CSF）、细胞培养上清液

检测范围：9.38 - 600 pg/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：1.28 pg/mL

化合物交叉反应性如下：

Human Aβ (1-38)：100.0%

Human Aβ (1-33)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-34)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-36)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-37)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-39)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-40)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-41)：≤ 0.1%

Human Aβ (1-42)：≤ 0.1%

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

※在“预期用途”栏中标注为“研究试剂”的，不能用于诊断或任何医疗目的。

※本页面列出的说明书仅为示例。

检测结果计算方法：

在绘制标准曲线之前，请先从所有数据（包括标准品和待测样本）中减去空白对照的吸光度值。然后，在双对数坐标纸（log-log图）上，以标准品的浓度为横坐标，减去空白后的吸光度值为纵坐标，绘制标准品的吸光度与浓度的对应点。通过这些点绘制一条最平滑的曲线，即为标准曲线。

根据绘制的标准曲线，读取待测样本对应的浓度值。

※ 上述所示仅为典型的标准曲线示例，不能用于实际检测结果的计算。每次实验请务必自行绘制标准曲线。

文献参考：

1. Selkoe DJ. Normal and abnormal biology of the beta-amyloid precursor protein.Annu Rev Neurosci. 1994;17:489-517.

2. Wang R, Sweeney D, Gandy SE, Sisodia SS. The profile of soluble amyloid beta protein in cultured cell media. Detection and quantification of amyloid beta protein and variants by immunoprecipitation-mass spectrometry. J Biol Chem.1996 Dec 13;271(50):31894-902

3. Weggen S, Eriksen JL, Das P, Sagi SA, Wang R, Pietrzik CU, Findlay KA, Smith TE, Murphy MP, Bulter T, Kang DE, Marquez-Sterling N, Golde TE, Koo EH. A subset of NSAIDs lower amyloidogenic Abeta42 independently of cyclooxygenase activity. Nature. 2001 Nov 8;414(6860):212-6.

https://www.amyjet.com/products/27717-96Well.shtml

IBL-小鼠/大鼠β淀粉样蛋白（1-42）检测试剂盒，准确测定小/大鼠的Aβ1-42

这种经过修饰的分子起始于氨基末端的第3个残基——谷氨酸，研究发现它可通过分子内脱水反应转化为焦谷氨酸（参考文献3）。

本品可用于检测小鼠或大鼠血液样本（血清或血浆）中的Aβ1-42。由于本品与人类Aβ几乎无交叉反应，因此即使在样本中混有人类Aβ的情况下，也能准确测定小鼠和大鼠的Aβ1-42。

艾美捷IBL-小鼠/大鼠β淀粉样蛋白（1-42）检测试剂盒：

货号：27721-96Well

检测范围：

1.56 - 100 pg/mL  

0.35 – 22.6 pmol/L（以Aβ (1-42)分子量4418.0计算）

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，使用两种高度特异性的抗体。以四甲基联苯胺（TMB）作为显色底物，显色强度与小鼠/大鼠Aβ (1-42)的含量成正比。

预期用途：本IBL试剂盒可用于定量测定小鼠或大鼠血清或EDTA血浆中的Aβ (1-42)。

试剂盒组成：

1. 预包被板：抗小鼠/大鼠Aβ (38-42)兔IgG抗体亲和纯化 96孔 × 1  

2. 标记抗体浓缩液（30×）：HRP标记抗小鼠/大鼠Aβ (1-16)兔IgG Fab’片段亲和纯化 0.4 mL × 1  

3. 标准品：小鼠/大鼠Aβ (1-42) 0.5 mL × 2  

4. EIA缓冲液* 30 mL × 1  

5. 标记抗体稀释液* 12 mL × 1  

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1  

7. 终止液* 12 mL × 1  

8. 洗涤缓冲液浓缩液* 50 mL × 1  

* 为缓冲液或辅助试剂。

检测结果计算方法：

在绘制标准曲线之前，请先从所有数据（包括标准品和待测样本）中减去空白对照的吸光度值。然后，在双对数坐标纸（log-log图）上，以标准品的浓度为横坐标，减去空白后的吸光度值为纵坐标，绘制标准品的吸光度与浓度的对应点。通过这些点绘制一条最平滑的曲线，即为标准曲线。

根据绘制的标准曲线，读取待测样本对应的浓度值。

※ 上述所示仅为典型的标准曲线示例，不能用于实际检测结果的计算。每次实验请务必自行绘制标准曲线。

文献参考：

1. Selkoe DJ. Normal and abnormal biology of the beta-amyloid precursor protein.Annu Rev Neurosci. 1994;17:489-517.

2. Wang R, Sweeney D, Gandy SE, Sisodia SS. The profile of soluble amyloid beta protein in cultured cell media. Detection and quantification of amyloid beta protein and variants by immunoprecipitation-mass spectrometry. J Biol Chem.1996 Dec 13;271(50):31894-902.

3. Saido TC, Iwatsubo T, Mann DM, Shimada H, Ihara Y, Kawashima S. Dominant and differential deposition of distinct beta-amyloid peptide species, A beta N3(pE), in senile plaques. Neuron. 1995 Feb;14(2):457-66.

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IBL-人淀粉样蛋白β寡聚体（82E1特异性）检测试剂盒检测原理&结果计算方法

研究表明，将从细胞分泌的Aβ寡聚体或从阿尔茨海默病（AD）患者大脑中提取的Aβ寡聚体注入大鼠脑内，会引发突触功能障碍和学习记忆能力的下降。此外，与健康个体相比，AD患者大脑中Aβ寡聚体的含量确实显著升高。

艾美捷IBL-人淀粉样蛋白β寡聚体（82E1特异性）检测试剂盒：

货号：27725-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：人类

检测样本类型：EDTA血浆、血清、脑组织提取物

检测范围：18.98 ～ 1215 pmol/L

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：4.41 pmol/L

化合物交叉反应性如下：

Aβ (1-16) 二聚体肽：100.0%

Aβ (1-40) 肽：0.27%

Aβ (N3pE-40) 肽：≦ 0.1%

Aβ (N3pE-42) 肽：≦ 0.1%

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

预包被板：抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG单克隆抗体亲和纯化 96孔 × 1

标记抗体浓缩液（30×）：HRP标记抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG单克隆抗体亲和纯化 0.1 mL × 1

标准品：人Aβ (1-16) 二聚体 0.5 mL × 2

EIA缓冲液 30 mL × 1

标记抗体稀释液 12 mL × 1

显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

终止液 12 mL × 1

洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

初次孵育用U型板（贴有标签）96孔 × 1

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心ELISA法。首先将样本与酶标记抗体在U型板中进行初步孵育反应，然后将该混合物转移至预包被板中进行第二步反应。洗涤去除未与包被抗体结合的成分后，使用四甲基联苯胺（TMB）作为显色底物。显色强度反映了与抗人Aβ（N）抗体（82E1）结合的分子的数量，该抗体特异性识别人类Aβ的N端，并能识别具有两个或以上表位的分子（如寡聚体、聚合物等）。检测结果以摩尔浓度表示，并以Aβ (1-16)二聚体为标准进行相对定量。

预期用途：

1、本ELISA试剂盒可检测血清、EDTA血浆和脑组织提取物中，与抗人Aβ（N）（82E1）小鼠单克隆抗体结合并具有两个或以上表位的人类Aβ分子（如寡聚体、聚合物等）。

2、由于检测结果是以Aβ二聚体为标准进行摩尔浓度计算的，因此与所检测分子的重量或数量并不直接成正比。

注意事项：

1）样本应在采集后尽快检测。如需保存，请冷冻储存，避免反复冻融。解冻时应在低温下进行，并在检测前充分混匀。

2）如有需要，请使用“4号 EIA缓冲液”对样本进行稀释。

3）建议对样本和标准品进行重复检测。

4）样本应保持在中性pH范围内。有机溶剂的污染可能会影响检测结果。

5）洗涤预包被板时，请仅使用本试剂盒提供的洗涤缓冲液。洗涤不充分可能导致检测失败。

6）洗涤后应将板轻叩在纸巾上以去除残留液体，切勿用纸巾擦拭孔壁。

7）“6号 显色底物”对光敏感，应避光保存，并避免与金属接触。

8）加入“7号 终止液”后，请在30分钟内完成检测。

检测结果计算方法：

在绘制标准曲线之前，请先从所有数据（包括标准品和待测样本）中减去空白对照的吸光度值。然后，在双对数坐标纸（log-log图）上，以标准品的浓度为横坐标，减去空白后的吸光度值为纵坐标，绘制标准品的吸光度与浓度的对应点。通过这些点绘制一条最平滑的曲线，即为标准曲线。

根据绘制的标准曲线，读取待测样本对应的浓度值。

※ 上述所示仅为典型的标准曲线示例，不能用于实际检测结果的计算。每次实验请务必自行绘制标准曲线。

文献参考：

1. Xia W, Yang T, Shankar G, Smith IM, Shen Y, Walsh DM, Selkoe DJ. A specific enzyme-linked immunosorbent assay for measuring beta-amyloid protein oligomers in human plasma and brain tissue of patients with Alzheimer disease.Arch Neurol. 2009 Feb;66(2):190-9.

2. Walsh DM, Klyubin I, Fadeeva JV, Cullen WK, Anwyl R, Wolfe MS, Rowan MJ,Selkoe DJ. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 2002, 4;416(6880):535-9.

3. Shankar GM, Li S, Mehta TH, Garcia-Munoz A, Shepardson NE, Smith I, Brett FM, Farrell MA, Rowan MJ, Lemere CA, Regan CM, Walsh DM, Sabatini BL,Selkoe DJ. Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008, ;14(8):837-42.

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IBL-人β淀粉样蛋白毒性寡聚物检测试剂盒检测结果计算方案

淀粉样β（淀粉样β）42寡聚被认为是阿尔茨海默病（AD）的早期事件。Irie等人通过系统脯氨酸扫描和固态核磁共振研究提出了他们的假设，即淀粉样β42聚集时在22和23位具有转弯结构的淀粉样β构象具有很高的毒性，也容易形成寡聚体。1）人们认为，有毒的淀粉样贝塔构象是稳定的，很容易形成神经毒性寡聚物。该抗体（克隆：24B3）特异性检测有毒的淀粉样蛋白β构象，用于开发ELISA检测试剂盒。2）该试剂盒可以选择性地测量脑脊液中推测的淀粉样肽β低聚物。

艾美捷IBL-人β淀粉样蛋白毒性寡聚物检测试剂盒：

货号：27709-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：人类

检测样本类型：脑脊液（CSF）

检测范围：3.13 ~ 200 pg/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.27 pg/mL

化合物交叉反应性如下：

人 Aβ (1-40)：≦0.1%

人 Aβ (1-42)：≦0.1%

储存条件：2 - 8 ℃

检测服务：可提供

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

1. 预包被板：（抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG抗体）96孔 × 1  

2. 标记抗体浓缩液：（30×）HRP标记抗AβE22P 24B3小鼠IgG Fab’ 0.4 mL × 1  

3. 标准品：（E22P-Aβ40二聚体）0.5 mL × 2  

4. EIA缓冲液 30 mL × 1  

5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1  

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1  

7. 终止液 12 mL × 1  

8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1  

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预包被板上固定有捕获抗体，样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺（TMB）显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

操作注意事项：

1. 样本应在采集后尽快检测。如需储存，请冷冻保存，避免反复冻融。解冻时应在低温下进行，并在检测前充分混匀。  

2. 样本应使用本试剂盒中的“4号 EIA缓冲液”进行稀释。  

3. 建议对样本和标准品进行重复检测。  

4. 每次实验都应绘制标准曲线。  

5. 样本应保持在中性pH范围内，有机溶剂的污染可能会影响检测结果。  

6. 所有试剂在使用前应恢复至室温，并轻轻充分混匀。混匀后请确认试剂质量无变化。  

7. 洗涤预包被板时，请仅使用本试剂盒提供的“8号 洗涤缓冲液浓缩液”。洗涤不充分可能导致检测失败。  

8. 若使用洗瓶，请将洗涤缓冲液注满每个孔，倒置板子并轻轻甩动，确保液体完全排出。请按说明书重复洗涤步骤，避免洗涤不彻底。  

9. 去除洗涤缓冲液后，请将板子轻叩在干净的纸巾上，确保孔内液体完全去除，注意纸巾不要接触孔内壁。  

10. “6号 显色底物（TMB溶液）”对光敏感，应避光保存，并避免与金属接触。每次使用时应按需取量，放入干净的容器中。  

11. 加入TMB溶液后，孔内液体逐渐变为蓝色。在此过程中，板子应避光保存。收集容器中剩余的TMB溶液不得倒回原瓶，以免污染。  

12. 加入“7号 终止液”后，应在30分钟内完成吸光度（O.D.）测定。

检测结果计算方法：

1. 以标准品的浓度为横轴，吸光度（O.D.）为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线（如双对数转换的二次回归）拟合各点。  

2. 根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。  

3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

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IBL-小鼠总血管紧张素原检测试剂盒检测步骤和原理说明

血管紧张素原（Angiotensinogen）是血管紧张素（Angiotensin）的前体蛋白，可被位于肾脏入球小管旁细胞（JG细胞）分泌的肾素（Renin）酶切割，生成血管紧张素I（Angiotensin I）。随后，血管紧张素I在血管紧张素转换酶（ACE）的作用下进一步被切割，生成血管紧张素II（Angiotensin II）。

在肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）中，血管紧张素II具有全身动脉收缩的重要作用，并能刺激肾上腺皮质分泌醛固酮（Aldosterone）。醛固酮促进体内钠的潴留，从而增加血容量、心输出量以及外周血管阻力（PVR）。当血压升高后，肾素的分泌会受到抑制。

过去，常通过检测血浆肾素活性（PRA）、活性肾素浓度（ARC）或其组合来评估RAAS中肾素的活性，但这些方法未充分考虑体位（如站立或坐位）以及一天内不同时间的变化。根据Kobori等人的研究，提出通过检测血液中完整型血管紧张素原（Intact Angiotensinogen）和总血管紧张素原（包括被肾素切割后的Des AI Angiotensinogen）的比值，可以获得更稳定的肾素活性生物标志物。

血管紧张素原的检测在原发性醛固酮增多症、新型RAAS抑制剂以及心血管和肾脏血管疾病等研究领域具有重要价值。

近年来，由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）与RAAS系统（包括ACE抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂ARBs）之间的关系也已成为全球研究的热点。

本试剂盒可定量检测小鼠血清、血浆及细胞培养上清液中的总血管紧张素原（包括完整型血管紧张素原和被肾素切割后的Des AI血管紧张素原）。

艾美捷IBL-小鼠总血管紧张素原检测试剂盒：

货号：27103-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验ELISA.

标记物：辣根过氧化物酶HRP.

适用物种：小鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆、细胞培养上清液

※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。.

检测范围：0.16 - 10 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.03 ng/mL

特异性：可特异性检测小鼠血清、EDTA血浆和细胞培养上清液中的总血管紧张素原。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

试剂盒组成：

1. 预包被板：抗小鼠AGT135.兔IgG亲和纯化.96孔 × 1

2. 标记抗体浓缩液：30×.HRP标记抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’亲和纯化 0.4 mL × 1

3. 标准品：重组小鼠血管紧张素原.0.5 mL × 2

4. EIA缓冲液 30 mL × 1

5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

7. 终止液 12 mL × 1

8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法ELISA.。预包被板上固定有捕获抗体，将样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺TMB.显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

检测步骤：

1.加入空白对照   确定空白对照孔，每孔加入100 uL的“4号 EIA缓冲液”。

2.加入准备好的样本和标准品   每孔加入100 uL准备好的样本和标准品。

3.盖上板盖，进行孵育第一步反应。

4.洗涤   使用准备好的洗涤缓冲液洗涤板孔，并彻底去除液体。

5.加入准备好的标记抗体   每孔加入100 uL准备好的标记抗体。

6.盖上板盖，进行孵育第二步反应.。

7.洗涤   使用准备好的洗涤缓冲液彻底洗涤板孔，并完全去除液体。

8.加入“6号 显色底物 - TMB溶液”   每孔加入100 uL TMB溶液。

9.避光孵育。

10.加入“7号 终止液”   每孔加入100 uL终止液。

11.测定吸光度O.D..   清除板底污垢或水滴，确认孔内液体表面无气泡后，以空白对照为基准，测定标准品和样本的吸光度。

测定波长：450 nm。如使用双波长测定：主波长为450 nm，副波长为600～650 nm。

检测结果计算方法：

1. 以标准品浓度为横轴，吸光度O.D..为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线如双对数转换后的二次回归.拟合各点。

2. 根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。

3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

标准曲线示例及实测值：

备注1：

根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度O.D..值可能越低。

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IBL-大鼠血管紧张素总原检测试剂盒丨操作手册与试剂配制方法

本试剂盒可定量检测大鼠血清和血浆样本中的总血管紧张素原（包括完整型血管紧张素原和被肾素切割后的Des AI血管紧张素原）。

艾美捷IBL-大鼠血管紧张素总原检测试剂盒：

货号：27104-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：大鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆

（※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。）

检测范围：0.08 - 5 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.009 ng/mL

特异性：可特异性检测大鼠血清和EDTA血浆中的总血管紧张素原。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

备注1：根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度（O.D.）值可能越低。

试剂盒组成：

预包被板：（抗大鼠AGT（135）兔IgG亲和纯化）96孔 × 1

标记抗体浓缩液：（30×）HRP标记抗大鼠AGT（405）兔IgG Fab’亲和纯化 0.4 mL × 1

标准品：（重组大鼠血管紧张素原）0.5 mL × 2

EIA缓冲液 30 mL × 1

标记抗体稀释液 12 mL × 1

显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

终止液 12 mL × 1

洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

检测原理：

该试剂盒为固相夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）。当一抗被涂覆在平板上时，样品和标准品被加入到用于第一反应的孔。反应后，HRP偶联的二抗加入孔中进行第二次反应。洗干净后，解开次级将抗体四甲基联苯胺（TMB）加入孔中并显色。

操作手册与试剂配制方法：

一、需自备但试剂盒中未提供的材料

酶标仪（Plate reader）

微量移液器及吸头

稀释用试管

量筒和烧杯

去离子水

洗板机（Plate washer）

纸巾

收集容器（例如：洁净的一次性试管）

冰箱

二、准备工作

1、洗涤缓冲液的配制

将“8号 洗涤缓冲液浓缩液”用去离子水稀释40倍，作为实验用洗涤缓冲液。根据实际需要调整配制量。

2、标记抗体的配制

使用洁净的收集容器，将“2号 标记抗体浓缩液”用“5号 标记抗体稀释液”稀释30倍，混匀后备用。

3、标准品的配制

向“3号 标准品”瓶中加入0.5 mL去离子水，充分溶解。溶解后标准品浓度为10 ng/mL。

配制好的标准品可分装后冷冻保存，但不得反复冻融。

准备7支试管用于标准品稀释，每管加入230 μL的“4号 EIA缓冲液”。

将10 ng/mL的标准品取230 μL加入第一支试管（Tube-1，5 ng/mL），轻轻混匀。

然后从Tube-1中取230 μL加入第二支试管（Tube-2，2.5 ng/mL），轻轻混匀。

依此类推，进行2倍系列稀释，共配制7个浓度梯度的标准品，浓度范围从5 ng/mL至0.08 ng/mL。

标准品稀释浓度如下：

Tube-1：5 ng/mL

Tube-2：2.5 ng/mL

Tube-3：1.25 ng/mL

Tube-4：0.63 ng/mL

Tube-5：0.31 ng/mL

Tube-6：0.16 ng/mL

Tube-7：0.08 ng/mL

4、待测样本的配制

使用本试剂盒中的“4号 EIA缓冲液”对待测样本进行稀释，稀释比例如下：

大鼠血清或EDTA血浆：至少稀释2,000倍。

如需大量使用EIA缓冲液，可另行购买“大鼠血管紧张素原EIA缓冲液（100 mL，产品编号：27104D100）”。

检测结果计算方法：

1、以标准品的浓度为横轴，吸光度（O.D.）为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线（如双对数转换后的二次回归）拟合各点。

2、根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。

3、将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

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IBL-小鼠完整血管紧张素原检测试剂盒--特异性检测完整型血管紧张素原

血管紧张素原的检测在以下研究领域具有重要价值：原发性醛固酮增多症、新型肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）抑制剂的研究，以及心血管和肾脏血管疾病的研究。

近年来，由严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）与RAAS系统（包括ACE抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂ARBs）之间的关系，已成为全球研究的热点。

本试剂盒可定量检测小鼠血清和血浆样本中的完整型血管紧张素原（Full Length Angiotensinogen）。

艾美捷IBL-小鼠完整血管紧张素原检测试剂盒：

货号：27105-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：小鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆

（※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。）

检测范围：0.16 - 10 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.01 ng/mL

特异性：可特异性检测小鼠血清和EDTA血浆中的完整型血管紧张素原（intact Angiotensinogen）。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

备注1：根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度（O.D.）值可能越低。

试剂盒组成：

1. 预包被板：抗小鼠AGTAI.兔IgG亲和纯化* 96孔 × 1  

2. 标记抗体浓缩液：30×.HRP标记抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’亲和纯化* 0.4 mL × 1  

3. 标准品：重组小鼠完整型血管紧张素原 0.5 mL × 2  

4. EIA缓冲液 30 mL × 1  

5. 标记抗体稀释液 12 mL × 1  

6. 显色底物：TMB溶液 15 mL × 1  

7. 终止液 12 mL × 1  

8. 洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1  

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法ELISA.。预包被板上固定有捕获抗体，将样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺TMB.显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

检测步骤：

1.加入空白对照  确定空白对照孔，每孔加入100 uL的“4号 EIA缓冲液”。

2.加入准备好的样本和标准品  每孔加入100 uL准备好的样本和标准品。

3.盖上板盖，进行孵育第一步反应.。

4.洗涤  使用准备好的洗涤缓冲液洗涤板孔，并彻底去除液体。

5.加入准备好的标记抗体  每孔加入100 uL准备好的标记抗体。

6.盖上板盖，进行孵育第二步反应.。

7.洗涤  使用准备好的洗涤缓冲液彻底洗涤板孔，并完全去除液体。

8.加入“6号 显色底物 - TMB溶液”  每孔加入100 uL TMB溶液。

9.避光孵育。

10.加入“7号 终止液”  每孔加入100 uL终止液。

11.测定吸光度O.D..  清除板底污垢或水滴，确认孔内液体表面无气泡后，以空白对照为基准，测定标准品和样本的吸光度。  

测定波长：450 nm。如使用双波长测定：主波长为450 nm，副波长为600～650 nm。

检测结果计算方法：

1. 以标准品浓度为横轴，吸光度O.D..为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线如双对数转换后的二次回归.拟合各点。  

2. 根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。  

3. 将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

标准曲线示例及实测值：

此处可根据实际实验数据绘制标准曲线并记录样本测定结果.

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IBL-大鼠完整血管紧张素原检测试剂盒，高灵敏度测定大鼠血清和血浆样本中的完整血管紧张素原

该试剂盒可定量测定大鼠血清和血浆样本中的完整血管紧张素原（全长血管紧张素源）。

艾美捷IBL-大鼠完整血管紧张素原检测试剂盒：

货号：27106-96Well

预期用途：研究用试剂

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

标记物：辣根过氧化物酶（HRP）

适用物种：大鼠

检测样本类型：血清、EDTA血浆

（※ 根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买，详情请参考说明书。）

检测范围：0.08 - 5 ng/mL

第一步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育过夜

第二步反应条件：2 - 8 ℃ 孵育60分钟

灵敏度：0.002 ng/mL

特异性：可特异性检测大鼠血清和EDTA血浆中的完整型血管紧张素原（intact Angiotensinogen）。

储存条件：2 - 8 ℃

包装规格：96孔板 × 1

备注1：根据样本类型，可能需要额外添加EIA缓冲液。EIA缓冲液需另行购买。请务必使用本产品专用的EIA缓冲液。

备注2：**操作注意事项**

每次反应后请立即使用洗板机进行洗涤，设置等待时间为0秒。

洗涤时间越长，吸光度（O.D.）值可能越低。

试剂盒组成：

预包被板：抗大鼠AGT（AI）兔IgG亲和纯化* 96孔 × 1

标记抗体浓缩液：（30×）HRP标记抗大鼠AGT（405）兔IgG Fab’亲和纯化* 0.4 mL × 1

标准品：重组大鼠完整型血管紧张素原* 0.5 mL × 2

EIA缓冲液 30 mL × 1

标记抗体稀释液 12 mL × 1

显色底物：TMB溶液 15 mL × 1

终止液 12 mL × 1

洗涤缓冲液浓缩液 50 mL × 1

检测原理：

本试剂盒采用固相夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预包被板上固定有捕获抗体，将样本和标准品加入孔中进行第一步反应。反应后，加入HRP标记的检测抗体进行第二步反应。洗涤去除未结合的抗体后，加入四甲基联苯胺（TMB）显色底物，显色强度与目标分子的含量成正比。

检测结果计算方法：

以标准品的浓度为横轴，吸光度（O.D.）为纵轴，绘制标准曲线。可使用适当的回归曲线（如双对数转换后的二次回归）拟合各点。

根据标准曲线，读取待测样本的吸光度对应的浓度值。

将读取的浓度值乘以样本的稀释倍数，计算最终浓度。

标准曲线示例及实测值：

https://www.amyjet.com/products/27106-96Well.shtml