HDAC10蛋白，FLAG-Tag重组，高效纯化和检测

HDAC10蛋白，FLAG-Tag重组，高效纯化和检测

HDAC10（组蛋白去乙酰化酶10）是一种重要的表观遗传调控蛋白，属于组蛋白去乙酰化酶家族。它通过去除组蛋白上的乙酰基团，调控基因表达和染色质结构，从而影响多种生物学过程，包括细胞分化、增殖和凋亡。HDAC10在多种疾病的发生发展中也扮演着关键角色，如癌症和神经退行性疾病。FLAG-Tag重组HDAC10蛋白是通过基因工程技术在杆状病毒-Sf9细胞表达系统中生产的，带有N端FLAG标签，便于纯化和检测，广泛应用于基础研究和药物开发。

HDAC10作为表观遗传调控的关键因子，其重组蛋白的开发为深入研究其生物学功能提供了有力工具。通过FLAG-Tag技术，研究人员可以方便地对HDAC10进行免疫沉淀、Western Blot等实验操作，解析其在细胞内的相互作用网络和信号通路。此外，重组HDAC10蛋白还可用于结构生物学研究，为揭示其催化机制和开发特异性抑制剂提供结构基础。其在多种疾病模型中的应用，也为探索HDAC10作为治疗靶点的潜力提供了重要依据。

人HDAC10，也称为组蛋白去乙酰化酶10、多胺去乙酰化酶HDAC10和HD10，GenBank登录号为NM_032019，氨基酸序列2-631，带有N端FLAG标签，表达于杆状病毒感染的Sf9细胞表达系统。

艾美捷Epigentek-HDAC10蛋白，FLAG-Tag重组：

货号：E24040-1

分子量：67 kDa

制剂：40 mM Tris-HCl，pH 8.0，110 mM NaCl，2.2 mM KCl，0.04% Tween-20，20%甘油和90 ug/ml FLAG肽。

来源：人类物种，表达于Sf9宿主物种/表达系统

规格：50 ug

标签：N端FLAG标签

储存温度与条件：在-80°C下储存，最长可保存6个月。避免反复冻融。

纯度：≥62%

应用说明：适用于研究组蛋白去乙酰化、基因表达调控、染色质结构及相关生物学过程。

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EpiNext NGS条形码（索引）套件--高通量和成本降低

EpiNext NGS条形码（索引）套装是专为Illumina平台（包括GAIIx、HiSeq、MiSeq和NextSeq）的下一代测序（NGS）设计的，用于构建多重DNA/RNA文库。根据套装的规格，该产品包含12个或24个DNA条形码，每个条形码包含一个索引序列和流动池结合序列，并可以在文库制备过程中连接到样本插入片段上。通过使用EpiNext NGS条形码，可以将多个样本混合到一个流动池中进行多重测序。将条形码化的样本混合到一个流动池中，可以显著减少手动操作时间，并在NGS中提供高质量的数据。

EpiNext NGS条形码（索引）套装具有以下特点：

EpiNext NGS条形码（索引）套装中的条形码可用于单端、双端和多重测序，并且与Illumina NGS的各种文库制备工作流程兼容，包括DNA-seq、RNA-seq、ChIP-seq、MethylC-seq、MeDIP-seq、hMeDIP-seq、DNA亚硫酸氢盐测序、oxBS-seq和RNA亚硫酸氢盐测序。

这些条形码还针对EpigenTek的EpiNext NGS文库制备试剂盒系列进行了优化，包括EpiNext DNA文库制备试剂盒（Illumina）、EpiNext高灵敏度DNA文库制备试剂盒（Illumina）、EpiNext亚硫酸氢盐后DNA文库制备试剂盒（Illumina）、EpiNext亚硫酸氢盐测序高灵敏度试剂盒（Illumina）、EpiNext ChIP-Seq高灵敏度试剂盒（Illumina）、EpiNext RNA亚硫酸氢盐测序试剂盒和EpiNext MeDIP-Seq试剂盒。

高通量和成本降低：最多可以处理144个或288个多重样本，这使得可以在一个测序流动池上对2-12个或2-24个片段文库样本进行多重测序，从而显著降低每个样本的成本。

条形码的索引序列设计为抗错误的，能够正确区分不同样本。

这些条形码可以最大限度地减少基于PCR扩增的偏差，并防止由于PCR过程中引入的单碱基错误而导致的不良读取。

艾美捷Epigentek-EpiNext NGS条形码（索引）套件：

货号：P-1060-288

输入类型：DNA  

研究领域：下一代测序  

目标应用：文库构建  

容器格式：柱/管  

工作流程：

图：DNA文库制备的工作流程 EpiNextNGS条形码（索引）集

引用文献：

Perez-Maldonado MA et. al. (April 2024). Influence of DNA-methylation at multiple stages of limb chondrogenesis. Dev Biol.

Cheng et. al. (March 2021). Utilizing systems biology to reveal cellular responses to peroxisome proliferator-activated receptor γ ligand exposure Current Research in Toxicology. 2:169-178.

Liu XS et. al. (February 2018). Rescue of Fragile X Syndrome Neurons by DNA Methylation Editing of the FMR1 Gene. Cell. 172(5):979-992.e6.

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EpiQuik DNA清洁和浓缩试剂盒，<5分钟最快的处理

DNA清洁通常用于去除可能影响下游应用的缓冲液盐、酶或其他物质。EpiQuik DNA清洁与浓缩试剂盒确保无论下游应用是什么，都能提供即用型DNA。

EpiQuik DNA清洁与浓缩试剂盒是一套完整的必需组件，适用于从各种DNA样本中清洁和浓缩DNA，尤其是那些DNA浓度较低的样本，如显微切割样本、石蜡包埋组织、限制性酶切反应、PCR反应以及自制小量制备样本。该试剂盒具有以下优势和特点：

1、最快的处理流程（<5分钟）

2、清洁和浓缩后的DNA超纯，能高效去除污染物（盐类、蛋白质、酶、核苷酸、PCR抑制剂、引物等）

3、DNA回收率高（输入DNA的回收率>90%）

艾美捷Epigentek-EpiQuik DNA清洁和浓缩试剂盒（#P-1068-050）原理与流程：

该试剂盒采用专有的DNA结合缓冲液处理DNA样本。样本中的DNA会紧密地结合到快速离心柱（Fast-Spin Column）的滤膜上。经过洗涤缓冲液清洗后，DNA可以轻松地用洗脱液在8-10 ul中回收。清洁和浓缩后的DNA已准备好用于下游应用。

EpiQuik DNA清洁与浓缩试剂盒的使用流程示意图。

EpiQuik DNA清洁与浓缩试剂盒能够实现输入DNA的回收率>90%（长度>50 bp）

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EpiNext RRBS文库快速试剂盒，4小时完成，完全转化

EpiNext™ RRBS文库快速试剂盒专为Illumina平台设计，用于制备简化代表性亚硫酸氢盐测序（RRBS）DNA文库。该试剂盒经过优化的协议和组分，允许使用亚纳克级DNA进行MSP1 DNA消化和亚硫酸氢盐转化，随后在不到4小时内完成非条形码（单重）或条形码（多重）文库构建。

艾美捷Epigentek-EpiNext RRBS文库快速试剂盒（#P-1069-24）具有以下优势：

创新方法：允许快速制备合适大小的富含CpG的DNA片段，并进行亚硫酸氢盐转化。亚硫酸氢盐处理后的DNA可以直接连接到接头上，从而消除了在其他RRBS方法中常见的接头连接片段断裂的可能性。

快速且简化的流程：从DNA酶消化到可直接使用的文库DNA，整个过程可在4小时内完成。

完全转化：将未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶（>99%），甲基化胞嘧啶错误转化为胸腺嘧啶的情况极少。

高灵敏度和效率：创新的亚硫酸氢盐DNA接头连接方法消除了片段丢失和选择偏差，使输入DNA量可低至10 ng，非常适合珍贵且有限样本的甲基化分析。该试剂盒可用于非条形码（单重）和条形码（多重）DNA文库的制备。

极其便捷：试剂盒包含DNA文库制备每个步骤所需的所有组分，足够用于MSP1消化、亚硫酸氢盐转化、连接、清洁、大小选择和文库扩增，从而实现亚硫酸氢盐DNA文库制备的简化，以获得最可靠和一致的结果。

最小偏差：超高保真扩增可实现DNA文库的高产量，并具有最小的序列偏差和低错误率。

广泛的样本适用性：起始材料可以是来自各种组织/细胞样本的基因组DNA，如新鲜和冷冻组织、培养细胞（来自烧瓶或微孔板）、显微切割样本、福尔马林固定石蜡包埋组织、活检样本、胚胎细胞、血浆/血清样本和体液样本等。

EpiNext RRBS文库快速试剂盒原理与流程：

该试剂盒包含从微量输入DNA生成的亚硫酸氢盐DNA直接制备文库所需的所有试剂。在此制备过程中，通过MSP1消化富集合适大小的富含CpG的DNA片段，并进行亚硫酸氢盐转化。亚硫酸氢盐处理后的DNA以单链形式存在，随后同时转化为双链DNA并连接接头。接下来，使用MQ结合珠子对连接的片段进行大小选择和纯化，最后使用高保真PCR混合液进行扩增。该流程确保从最少的起始材料中获得最大产量，并提供具有低错误率和最小偏差的文库DNA的高精度扩增。

图：库片段的大小分布。使用EpiNext从人Hela DNA制备RRBS DNA文库RRBS文库快速试剂盒：输入DNA：20 ng（红色痕量），200 ng（蓝色痕量）。片段大小为160-800bps，峰值大小为320 bps。

起始材料：

起始材料可以是来自各种组织/细胞样本的基因组DNA，如新鲜和冷冻组织、培养细胞（来自烧瓶或微孔板）、显微切割样本、福尔马林固定石蜡包埋组织、血浆/血清、体液样本等。DNA不应经过任何先前的限制性酶消化步骤。质粒DNA可用于亚硫酸氢盐处理，无论是否经过预先线性化，因为该试剂盒允许在整个DNA亚硫酸氢盐转化过程中保持DNA的变性状态，并直接将接头连接到亚硫酸氢盐DNA上。DNA输入量可在10 ng至400 ng之间。为了获得最佳制备效果，建议输入量为200 ng。

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EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒，极快速的三步协议

EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒是一套完整的优化试剂，专为通过下一代测序技术对各种生物样本的染色质可及性进行全基因组分析而设计，包括核小体/转录因子定位。

艾美捷Epigentek-EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒（#P-1071-12）具有以下优势：

极快速的三步协议：仅需1小时55分钟即可完成从细胞/组织样本到测序就绪文库DNA的整个流程，比ATAC-seq更快。该方法可最大限度减少核损伤，保留染色质结构，并避免线粒体污染。

用途广泛：适用于新鲜/冷冻组织的小细胞量样本，即使在恶劣环境下也能使用，与DNAse-seq/MNase-seq相比具有明显优势。

减少偏差：由于缺乏序列特异性切割，该方法可最大限度减少片段化偏差以及与GC或AT含量相关的偏差。

全面的试剂盒：包含每个步骤所需的所有必要组分，确保EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒的便捷性和成本效益。

原理与流程：

该试剂盒包含从细胞/组织样本通过NGS进行染色质可及性全基因组分析所需的所有必要试剂。在此实验中，从细胞/组织中分离出细胞核，并将其暴露于独特的核酸切割酶混合物中。染色质被片段化，目标染色质两端的DNA序列被切割/移除，而目标蛋白/组蛋白占据的DNA序列则不受影响。然后将接头连接到目标蛋白/组蛋白结合的DNA片段上。连接后的DNA被释放、纯化，并使用高保真PCR混合液进行文库DNA构建。

左图. EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒的流程示意图。

右图. EpiNext染色质可及性测序DNA文库的特性分析。

从100,000个MCF-7细胞中分离的染色质被切割并用于EpiNext染色质可及性测序快速试剂盒的DNA文库制备。该文库通过Bioanalyzer进行分析。

起始材料与输入量：

起始材料可以包括各种哺乳动物组织或细胞样本，例如来自烧瓶或微孔板培养的细胞、新鲜和冷冻组织等。最佳反应所需的细胞/组织量可以从50,000个细胞或5 mg组织到500,000个细胞或50 mg组织不等。

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表基因酶I型PRMT甲基转移酶活性/抑制测定试剂盒（比色法），3小时比色法流程

精氨酸组蛋白甲基化是众多重要的表观遗传标记之一，对于多种细胞过程的调控至关重要。组蛋白H3（精氨酸2、17、26）和H4（精氨酸3）的精氨酸甲基化能够促进转录激活，这一过程由蛋白精氨酸甲基转移酶（PRMTs）家族介导。人类中有9种PRMTs，但只有7种被报道能够甲基化组蛋白。这些酶可以介导精氨酸残基的单甲基化或二甲基化。它们以S-腺苷-L-蛋氨酸（SAM）作为甲基供体，将其转移到精氨酸的胍基侧链上。根据甲基添加的位置，PRMTs可以分为I型（PRMT1、PRMT2、PRMT3、CARM1/PRMT4、PRMT6和PRMT8）和II型（PRMT5和PRMT9）。

Epigenase I型PRMT甲基转移酶活性/抑制检测试剂盒（比色法）是一套完整的必需组件，用于测量来自多种物种（包括哺乳动物、植物、真菌和细菌）的核提取物或纯化酶（如PRMT1至PRMT4）的总I型PRMT活性或抑制情况，适用于多种形式的样本，包括培养细胞和新鲜组织。

艾美捷Epigentek-表基因酶I型PRMT甲基转移酶活性/抑制测定试剂盒（比色法）（#P-3098-48）具有以下优势：

3小时比色法流程：采用96孔条板微孔板格式，可手动或高通量分析。

直接检测I型PRMT活性：通过简单检测PRMT转化的甲基化产物来直接测量I型PRMT活性。

适用于细胞/组织提取物和纯化I型PRMT：既可以使用细胞/组织提取物，也可以使用纯化的I型PRMT，从而能够在体内和体外检测I型PRMT抑制剂的抑制效果。

灵敏度高：检测限低至10 ng纯化的PRMT6酶。

包含甲基化H4-Arg3标准品：可用于定量I型PRMT的比活性。

准确、可靠且一致性高：背景信号极低。

原理与流程：

在此实验中，I型PRMT底物被稳定地涂覆在微孔板孔中。活性I型PRMT（如PRMT1-4、PRMT6和PRMT8）能够结合底物，并从Adomet转移甲基以甲基化底物。甲基化产物可以被特异性抗体识别。通过在微孔板光谱仪上以450 nm波长读取吸光度，可以比色法测量与酶活性成正比的甲基化产物的比例或量。I型PRMT酶的活性与测量到的光密度强度成正比。

左图：I型PRMT活性检测的灵敏度演示  

通过使用重组PRMT1与Epigenase I型PRMT甲基转移酶活性/抑制检测试剂盒（比色法）进行实验，展示了I型PRMT活性检测的灵敏度。  

右图：使用I型PRMT检测标准生成的示例标准曲线。

起始材料：

输入材料可以是核提取物或纯化的I型酶（如PRMT1至PRMT4）。每个实验所需的核提取物量为1 ug至20 ug，最佳范围为5 ug至10 ug。纯化酶的用量为10 ng至500 ng，具体取决于酶的纯度和催化活性。

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EpiQuik MBD 2结合活性/抑制测定Ultra试剂盒，检测TET羟化酶抑制剂在体内和体外的效果

MBD2是MBD蛋白家族的成员。MBD2能够选择性地结合甲基化DNA，并通过招募转录抑制复合物来抑制甲基化靶基因的转录。作为一种能够识别甲基化CpG DNA的表观遗传“阅读器”蛋白，MBD2已被认证为癌症治疗的新靶点。此外，一些证据也表明该蛋白与神经发育有关。MBD2与甲基化DNA的结合活性可能会受到MBD2突变以及生化或药理干预的影响。选择性且强效的MBD2抑制可以诱导基因重新表达，这在癌细胞中MBD2基因破坏时已被观察到。因此，检测MBD2的结合活性及其抑制作用对于阐明基因激活和沉默的表观遗传调控机制至关重要，同时也有助于癌症和神经疾病治疗学的发展。

EpiQuik MBD2结合活性/抑制超敏检测试剂盒是一套完整的优化试剂，用于测量来自多种物种（包括哺乳动物、植物、真菌和细菌）的核提取物或纯化MBD2蛋白的MBD2结合活性或抑制情况，适用于多种形式的样本，包括但不限于培养细胞和新鲜/冷冻组织。

艾美捷Epigentek-EpiQuik MBD 2结合活性/抑制测定Ultra试剂盒（#P-3099-96）具有以下优势：

快速：比色法检测可在3小时内完成。  

直接：在有无抑制剂的情况下直接测量MBD2结合活性。  

用途广泛：适用于细胞/组织提取物或纯化的MBD2蛋白，可用于检测TET羟化酶抑制剂在体内和体外的效果。  

灵敏：能够检测低至10 ng纯化MBD2蛋白的活性。  

便捷：包含MBD2蛋白标准品，用于定量分析。  

灵活：采用条板微孔板格式，支持手动或高通量分析。

原理与流程：

在此实验中，甲基化DNA被稳定地涂覆在微孔板孔中。活性MBD2蛋白能够结合到甲基化DNA上。结合的MBD2蛋白可以通过特异性抗体识别。结合的MBD2-抗体复合物的信号强度与结合活性成正比，可以通过增强剂放大，并通过在微孔板光谱光度计上以450 nm波长读取吸光度来进行比色法测量。MBD2的结合活性与测量到的光密度强度成正比。

左图：EpiQuik MBD2结合活性/抑制超敏检测试剂盒的流程示意图。    

右图：使用MBD2蛋白标准生成的示例标准曲线。

起始材料与输入量：

输入材料可以是核提取物或纯化的MBD2蛋白。每个实验所需的核提取物量为2 ug至20 ug，最佳范围为5-10 ug。纯化蛋白的用量为10 ng至500 ng，具体取决于蛋白的纯度和催化活性。

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Epigenase APOBEC 3胞苷脱氨酶活性/抑制测定试剂盒，操作步骤简单，4小时内完成

APOBEC3胞嘧啶脱氨酶（载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3）是一个DNA/RNA编辑家族，包含7个亚型：APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G和APOBEC3H。APOBEC3仅存在于哺乳动物中，能够催化单链DNA或RNA中胞嘧啶（C）碱基的氨基去除，形成尿嘧啶（U）。APOBEC3引起的遗传改变会改变转录和mRNA处理过程，并积极参与多种生物学过程。APOBEC3是先天免疫系统的一部分，能够抵御各种DNA或RNA病毒，保护细胞的完整性。通过促进单链DNA/RNA中胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶，APOBEC3在病毒基因组中产生突变，从而抑制病毒复制。例如，有报道称APOBEC3在SARS-CoV-2基因组中引起的C到U突变是主导突变（>50%）。尽管APOBEC3赋予宿主对包括SARS-CoV-2在内的多种病毒的内在抗感染能力，但它也可能对病毒的进化产生潜在影响。APOBEC3在癌症中的DNA突变中贡献显著。作为癌症进化的主要驱动力之一，APOBEC3蛋白是多种肿瘤中检测到的基因组突变的主要原因之一。超过50%的癌症中可以观察到APOBEC3突变特征，这些特征促进了肿瘤的多样性，进一步推动疾病进展和对治疗的耐药性。

Epigenase APOBEC3胞嘧啶脱氨酶活性/抑制检测试剂盒是一套完整的优化缓冲液和试剂，用于测量来自人类和其他哺乳动物的细胞提取物或纯化的APOBEC3亚型（A3A、A3B、A3C、A3D、A3F和A3H）的总APOBEC3酶活性或抑制情况，适用于多种形式的样本，包括但不限于培养细胞和新鲜/冷冻组织。

艾美捷Epigentek-Epigenase APOBEC 3胞苷脱氨酶活性/抑制测定试剂盒（#P-3140-96）具有以下优势：

比色法检测：操作步骤简单，可在4小时内完成。  

直接测量总APOBEC3活性：通过简单检测APOBEC3转化的终产物来直接测量总APOBEC3活性。  

创新的试剂盒组成：背景信号极低，使检测过程简单、准确、可靠且一致。  

适用于细胞/组织提取物和纯化APOBEC3酶：可用于检测APOBEC3抑制剂在体内和体外的效果。  

高灵敏度：检测限低至10 ng纯化的APOBEC3酶。  

包含C到U转化标准品：用于定量APOBEC3的比活性。  

条板微孔板格式：支持手动或高通量分析。

原理与流程：

在此实验中，底物预先涂覆在微孔板孔中。活性APOBEC3酶结合到底物上，并将胞嘧啶转化为尿嘧啶产物。APOBEC3转化的产物可以通过特异性探针识别。通过在微孔板光谱光度计上以450 nm波长读取吸光度，可以比色法测量与酶活性成正比的尿嘧啶产物的比例或量。APOBEC3酶的活性与测量到的光密度强度成正比。

左图：使用APOBEC检测标准生成的示例标准曲线。    

右图：使用重组APOBEC3A实现的APOBEC3活性。  

使用Epigenase APOBEC3胞嘧啶脱氨酶活性/抑制检测试剂盒进行实验，添加了不同浓度的重组人APOBEC3A酶。

起始材料与输入量：

每个实验所需的细胞提取物量为2 ug至30 ug，最佳范围为15-20 ug。纯化酶的用量为10 ng至1 ug，具体取决于酶的类型、纯度和催化活性。

https://www.amyjet.com/products/P-3140-96.shtml