气相色谱-质谱法检测食品中的生物碱

作者:王莉莉，刘仲


    罂粟壳主要含有吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可丁，由于来源比较容易，不少商家和饭店为了吸引顾客，在火锅、烤鸡、麻辣串调料、肉汤等食品中加入罂粟壳粉。为查处这些违法事件，保护消费者的身体健康，必须依靠灵敏可靠的检测方法。目前已有报道用薄层层析法、气相色谱法、液相色谱法等分析食品、药品中的吗啡、可待因等成分，但都存在灵敏度较低，干扰严重等问题。本法采用气相色谱-质谱和离子存储技术(SIS)对汤料样品中的生物碱进行检测，使检测灵敏度大为提高。
    1 实验部分
    1．1 仪器与试剂
    VarianCP-3800气相色谱仪-Satum2200质谱仪；Varian Cp-Sill 8 CB／MS 30m×0.25mm×0.25μm弹性石英毛细管色谱柱。
    三氯甲烷，异丙醇，甲醇，醋酸，碳酸氢钠，碳酸钠，无水硫酸钠。
    标准储备溶液：准确称取吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱适量，用甲醇-三氯甲烷配制成含量各为1mg／ml。
    标准使用液：将上述储备液分别用甲醇稀释成浓度为可待因(1O、20、40、80μg／m1)、吗啡(20、40、80、100μg／m1)、蒂巴因(5、1O、20、40μg／m1)、罂粟碱(20、40、80、100μg／m1)的4个混合标准使用溶液。
    1．2 实验方法
    1．2．1 GC-MS分析条件柱温：初始温度180℃，保持2min，以20℃／min升至280℃，保持25 min；进样口温度：260℃；氮气流速：1ml／min；进样方式：不分流进样；进样量：lμl。离子阱温度：180℃，传输线温度：280℃，电离方式E源，电离能量7OeV，电子倍增器电压1800V。
    1．2．2 样品来源 济南市部分饭店、火锅店采集的火锅调料、肉汤等。
    1．2．3 样品处理 吸取汤料样品250～500 ml(固体样品取20～50g)，浓缩至50～100ml，加100ml 2.5％乙酸溶液，浸泡振摇1h，过滤至分液漏斗中。用1Oml水洗涤。合并滤液，加5g氯化钠，用1mol碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液调pH9.0±0.2，加三氯甲烷一异丙醇30、20、1Oml提取，每次15min，合并提取液，经无水硫酸钠过滤，浓缩近干，用甲醇定容至1ml，按上述仪器条件，分别用可待因(166、229、299)，吗啡(162、215、285)，蒂巴因(239、296、311)，罂粟碱(308、324、338／339)作SIS扫描。
    2 结果与讨论
    2．1 提取方法的选择 本实验对样品提取的溶剂、振摇提取的时间、缓冲溶液的选择、提取溶液的pH值等进行了研究。经过大量的实验，用该法提取具有方法简单、样品损失少，提取效率在86.4～95.5％，可以准确检测吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱0.15～1.0mg，实验时间短，有利于及时处理中毒事件。
    2．2 色谱、质谱条件的优化样品经提取后，分别用GC-MS全扫描、GC-MS选择离子扫描分析。样品含量高时可用全扫描，但干扰峰很多，结合质谱图可达到定性的目的。由于干扰对检测灵敏度有明显影响，定量时需经过柱净化后才能测定，所以采用3个选择离子扫描，除依据保留时间外，3个离子峰度的相对比例应与标准一致。选择离子扫描无需再进行柱净化，仍能得到杂质峰较少、分离效果好的图谱，有效提高检测灵敏度和准确度。
    2．3 方法的精密度和准确度 按本法取各种浓度生物碱混合标准液分别进样1μl，重复测定6次，取平均值绘制标准曲线，4种生物碱标准曲线相关系数、回归方程和相对标准偏差分别为：可待因r=0.9992、y=384.25x一34.67，rsd=6.93％；吗啡r=O.9986、y=131.54x一22.31、rsd=9.68％；蒂巴因r=O.9995、y=276.28x一34.93、rsd=5.97％；罂粟碱r=O.9991、y=268.59x一33.12、rsd=7.63％ 。
    在空白样品中分别加入20．00、40．00、1O．00、40．00μg／ml的混合标准溶液，按本法测定6次，4种生物碱回收率测定结果为：可待因平均回收率R=95.5％、rsd=4.53％；吗啡R=86.4％、rsd=5.12％；蒂巴因R=91.2％、rsd=6.91％；罂粟碱R=89.9％、rsd=6.28％。
    2．4 方法应用 用本法对济南市部分饭店、火锅点的调料和汤料进行了检测，共检测样品12份，火锅、麻辣串调料6份，均未检出罂粟壳；肉汤6份，有3份检出罂粟壳，其中检出可待因含量为0.36～2.34mg／kg，蒂巴因含量为0.71～1.21mg／kg，罂粟碱含量为0.082～0.36mg／kg。
[参考文献】
[1]王越．火锅调料中罂粟壳的高效液相色谱测定[J]．色谱，1999，17(4)：401．