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人血管生成素1(ANG-1)elisa试剂盒实验操作要点

上海一研生物科技有限公司2025年7月22日 4:22 点击:18

在完成人血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒实验操作时,需特别注意以下几个关键环节,以确保实验结果的准确性和可重复性。


首先,样本处理是实验成功的基础。血清或血浆样本应避免反复冻融,以免蛋白降解影响检测结果。离心后取上清液时需小心操作,避免吸入沉淀物或脂质层。若样本浓度过高,需按说明书要求进行适当稀释,并确保稀释液与试剂盒配套使用,避免引入干扰因素。


其次,加样过程需精准控制。使用移液器时,枪头需紧贴酶标板孔底部缓慢加入液体,避免产生气泡。每加完一个样本应立即更换枪头,防止交叉污染。对于标准品和待测样本,建议设置复孔以减少偶然误差。同时,注意记录加样顺序,便于后续数据分析。


温育环节对实验结果影响显著。需严格控制反应时间和温度,避免因环境波动导致信号偏差。温育时建议使用封板膜覆盖板孔,防止液体蒸发。若使用水浴箱,需确保温度均匀且稳定;若采用培养箱,应提前预热至设定温度。


洗涤步骤是降低非特异性结合的关键。建议使用自动洗板机以保证洗涤一致性,若手动操作,需确保每孔加满洗涤液并静置30秒后彻底弃净。洗涤后应在干净吸水纸上拍干板孔,但避免过度干燥导致包被抗体失活。


最后,显色与终止反应需严格计时。加入TMB底物后,建议每隔2分钟观察一次显色情况,当标准品梯度出现明显颜色差异时立即终止反应。终止液加入顺序应与底物一致,混匀时避免产生气泡干扰OD值读数。


完成检测后,应及时用酶标仪读取450nm处吸光度(参考波长630nm),并采用四参数拟合曲线计算样本浓度。若个别孔数据异常,需结合质控品结果判断是否剔除。整个实验过程应做好详细记录,包括试剂批号、环境温湿度等参数,以便追溯问题根源。通过规范操作和细节把控,可显著提高ANG-1检测的可靠性。


(来源: 上海一研生物科技有限公司


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