【产品速递】TIGIT人源化小鼠模型，助力肿瘤免疫治疗新进程

各位看官晚上好，一期一会的百奥赛图知识扩展课堂又来喽，今天小编带来一种视觉享受的分子，言归正传，GITR（glucocorticoid-induced TNFR-related protein）是TNF受体超家族成员 ，在多种肿瘤模型中可表现出抗肿瘤效果。GITR是目前免疫学家感兴趣的一种共刺激免疫检查点分子。

那么接下来，咱们就一起瞧瞧这个因吹斯汀的靶点分子吧~

基因功能简介

TNFRSF18（TNF受体超家族成员18）也称为糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白（GITR），其在包括T细胞在内的许多免疫细胞上表达。作为T细胞的共同刺激信号，TNFRSF18在T细胞活化后被上调，进而促进T细胞增殖。已知CD25⁺/CD4⁺调节性T细胞可介导免疫耐受，而GITR激动剂抗体可逆转这种免疫耐受，并在多种肿瘤模型中显示出抗肿瘤作用。

Figure 1：Model of GITR–GITRL interaction dynamics during an immune response.

目前，GITR是免疫学家热衷研究的共刺激检查点分子，参与抑制Treg细胞的抑制活性，并延长效应T细胞的存活。百奥赛图开发的B-hTNFRSF18(GITR) mice人源化小鼠为科学家们研发该靶点抗体药物的有效验证提供了有力的工具。

品系信息

qRT-PCR分析

通过qRT-PCR技术分析肝脏组织的的GITR基因在 mRNA水平的表达情况。

在C57BL/6与B-hGITR小鼠中，GITR基因表达并无显著性差异(n=3)。

蛋白表达分析

通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-hGITR小鼠的脾细胞。

在WT C57BL/6中可检测到小鼠GITR⁺细胞，而在纯合B-hGITR小鼠中可检测到人GITR⁺细胞。

通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-hGITR小鼠的Treg细胞。

在WT C57BL/6中可检测到小鼠GITR⁺细胞，而在纯合B-hGITR小鼠中可检测到人GITR⁺细胞。

B-hGITR小鼠的白细胞亚群分析

从C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。 

结果表明，纯合B-hGITR小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影响T，B，NK，粒细胞，单核细胞，DC和巨噬细胞的分化。

从C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。 

结果表明，纯合B-hGITR小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。

GITR抗体药效验证

将鼠结肠癌MC38细胞皮下植入杂合的B-hGITR小鼠中。

当肿瘤尺寸为约150±50mm³（n＝6）时，将小鼠分组。三种人GITR抗体以不同方式抑制肿瘤生长，证实B-hGITR小鼠模型是体内GITR抗体药理功效研究的有力工具。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。

将鼠结肠癌MC38细胞皮下植入纯合的B-hGITR小鼠中。

当肿瘤尺寸为约150±50mm³（n＝5）时，将小鼠分组。两种人GITR抗体以不同方式抑制肿瘤生长，证实B-hGITR小鼠模型是体内GITR抗体药理功效研究的有力工具。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。

B-hPD-1/hGITR mice

蛋白表达分析

通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-PD-1/GITR小鼠的脾细胞。

在WT C57BL/6小鼠中仅可检测到小鼠PD-1⁺ T细胞，而在纯合B-hPD-1/GITR小鼠中可检测到人PD-1⁺ T细胞。

通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-PD-1/GITR小鼠的脾细胞。

在WT C57BL/6小鼠中仅可检测到小鼠GITR⁺ T细胞，而在纯合B-hPD-1/GITR小鼠中可检测到人GITR⁺ T细胞。

B-hPD-1 / GITR小鼠的白细胞亚群分析

脾脏白细胞亚群分析

从C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。 

结果表明，纯合B-hPD-1/GITR小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似，hPD-1/hGITR的人源化不影响T，B，NK，单核细胞，DC和巨噬细胞的分化。

血液常规测试

血液常规测试

收集来自C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）的血液，并通过血液常规测试进行分析。结果，MCV中的C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之间存在显着差异。

血液生化测试

测试了C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠的血清AST/ALT水平（n=3）。结果表明，C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之间没有显着差异。

PD-1 Ab联合治疗与GITR Ab疗效评估-1

将鼠结肠癌MC38-hPD-L1细胞皮下植入纯合B-hPD-1/hGITR小鼠中。当肿瘤大小为大约100-150mm³（n＝5）时，将小鼠分组。与对照组相比，所有实验组均显示出明显的抑制作用。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。 

PD-1 Ab联合治疗与GITR Ab疗效评估-2

将鼠结肠癌MC38-hPD-L1细胞皮下植入纯合B-hPD-1/hGITR小鼠中。当肿瘤大小为大约100-150mm³（n＝5）时，将小鼠分组。与对照组相比，所有实验组均显示出明显的抑制作用。（A）肿瘤平均体积±SEM，（B）小鼠平均体重±SEM。

参考资料

Ethan M Shevach, Geoffrey L. The GITR–GITRL interaction: co-stimulation or contrasuppression of regulatory activity?  Nature Reviews Immunology 6: 613–618 (2006)，dol:10: 1038/nri1867