[干冰]泛素醛：高纯度，科研级DUB抑制剂

[干冰]泛素醛：高纯度，科研级DUB抑制剂

Ub-醛是通过将天然泛素中的第76位甘氨酸替换为2-氨基乙醛而合成的。在去泛素化酶（DUBs，例如UCH和大多数USPs）的活性位点中，Ub-醛的结合使得活性半胱氨酸的巯基与反应性醛基相邻。巯基对醛基的亲核攻击会形成一个稳定的泛素与去泛素化酶之间的加合物。因此，Ub-醛是一种强效的去泛素化酶自杀性抑制剂[1-5]。

艾美捷[干冰]泛素醛：

货号：SI-0250-0050  

物种：人  

来源：大肠杆菌  

标签：无  

分子量：8,548.9 Da  

数量：50 ug  

浓度：可变  

配方：液体，含0.05%乙酸  

储存条件：-20°C（干燥）；-80°C（溶液），避免反复冻融  

纯度：通过反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测，纯度大于95%  

物理状态：液体，含0.05%乙酸  

储存温度：-80°C。避免反复冻融。

应用：这种抑制剂可用于原位标记去泛素化酶，同时也能保护修饰蛋白上的多泛素链的完整性，便于进行分析或纯化。

参考图片：

文献参考：

1. Rajapurohitam, V., Bedard, N., and Wing, S.S., Control of ubiquitination of proteins in rat tissues by ubiquitin conjugating enzymes and isopeptidases. Am J Physiol Endocrinol Metab. 282:E739-E745 (2002).

2. Strayhorn, W.D. and Wadzinski, B.E., A novel in vitro assay for deubiquitination of IκBα. Arch Biochem Biophys. 400:76-84 (2002).

3. Wilkinson, K.D., Cox, M.J., Mayer, A.N., and Frey, T., Synthesis and characterization of ubiquitin ethyl ester, a new substrate for ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase. Biochemistry. 25(21):6644-9 (1986).

4. Wilkinson, K.D., Smith, S.E., O'Connor, L., Sternberg, E., Taggart, J.J., Berges, D.A., and Butt, T., A specific inhibitor of the ubiquitin activating enzyme: synthesis and characterization of adenosyl-phospho-ubiquitinol, a nonhydrolyzable ubiquitin adenylate analogue. Biochemistry.29(32):7373-80 (1990).

5. Mayer, A.N. and Wilkinson, K.D., Detection, resolution, and nomenclature of multiple ubiquitin carboxy-terminal esterases from bovine calf thymus. Biochemistry. 28:166-172 (1989).

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[干冰]泛素-AMC的制备与作用机制

泛素-AMC是通过将7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）连接到成熟泛素的C末端而制备的，这一过程会猝灭AMC的固有荧光。当与识别泛素的蛋白酶（例如USP2或UCHL3）孵育时，AMC被释放出来，荧光强度的增加可以通过在460 nm（激发波长380 nm）处进行测量。LifeSensors的泛素-AMC具有高纯度，从而提高了信噪比。该蛋白没有额外的标签。

艾美捷[干冰]泛素-AMC：

货号：SI-0220-0050  

纯度：通过HPLC检测，纯度大于95%  

分子量：通过质谱检测为8722 Da  

物理状态：冻干粉  

数量：50 ug  

溶解性：在DMSO或0.05%乙酸中溶解度大于1 mg/mL  

储存条件：干粉-20°C保存；溶液-80°C保存，避免反复冻融。

应用：用于测定泛素和泛素样水解酶的活性和特异性。适用于去泛素化酶活性调节剂的高通量筛选。

参考图片：

文献参考：

1) Shanmugham A and Ovaa H. DUBs and disease: activity assays for inhibitor development. Curr Opin Drug Discov Devel. 2008;11(5):688-96.

2) Mason, D.E., Ek, J., Peters, E.C. and Harris J.L. Substrate profiling of deubiquitin hydrolases with a positional scanning library and mass spectrometry. Biochemistry 2004, 43: p6535-44

3) Dang, L. C., F. D. Melandri, and R. L. Stein. Kinetic and mechanistic studies on the hydrolysis of ubiquitin C-terminal 7-amido-4-methylcoumarin by deubiquitinating enzymes. Biochemistry 1998 37: p1868-1879.

4) Stein RL, Chen Z, Melandri F. Kinetic studies of isopeptidase T: modulation of peptidase activity by ubiquitin. Biochemistry. 1995 34(39):p12616-23.

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大容量磁珠(阴性对照)，多泛素化蛋白下拉实验的阴性对照

大容量磁珠(阴性对照)--用于“预清洗”细胞裂解液，以及与磁珠偶联的TUBEs（UM401M和UM402M）联合使用时，作为多泛素化蛋白下拉实验的阴性对照。通过使用乙醇胺封闭激活的基质（与TUBEs偶联所用的基质相同）来制备对照磁珠。对照磁珠（1 mL）以pH 7.2的PBS悬浮液形式提供。

艾美捷大容量磁珠(阴性对照)：

货号：UM-0500M-1000  

标签：无  

分子量：不适用  

物理状态：液体  

数量：1 mL  

浓度：可变  

储存条件：+4°C，避免低于此温度保存

应用：用于“预清洗”细胞裂解液，以及与磁珠偶联的TUBEs（UM401M和UM402M）联合使用时，作为多泛素化蛋白下拉实验的阴性对照。

一般建议：

将100uL对照磁珠悬浮液与1 mL细胞裂解液（总蛋白浓度为3-5 mg/mL）混合，4°C孵育1小时。最终用户可能需要根据具体条件进行优化。

相关产品：

UE1003：PA950去复合缓冲液  

UB330：Cereblon/DDB1/Cul4A/Rbx1复合物  

SI0602P：K6连接的二泛素（磷酸化）  

UB331：VHL/Cul2/ELOB/ELOC/Rbx1复合物

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[干冰]K63连接特异性UbiTest-琼脂糖管洗脱试剂盒，目标蛋白信号增加，清楚表明蛋白泛素化

UbiTest试剂盒用于确定目标蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台改进了研究蛋白质泛素化最常用的方法：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体常常与底物的多泛素化形式相互作用不同。这是由于表位遮蔽、亲和力降低或选择性变化所导致的。一种更明确的证明蛋白质泛素化的方法是，在免疫印迹分析之前，将免疫沉淀与广谱去泛素化酶（DUB）消化相结合。经过DUB处理后，目标蛋白（POI）的信号增加，这清楚地表明该蛋白已被泛素化，即使在未处理的样本中没有明显的反应性也是如此。为了避免由于POI免疫反应性变化而可能产生的问题，UbiTest检测利用TUBEs来下拉多泛素化蛋白。TUBEs（串联泛素结合实体）是经过工程改造的串联泛素结合结构域，其对四泛素的解离常数在纳摩尔范围内。TUBE1已被证明能够结合所有8种连接类型。

确定目标蛋白上多泛素化的连接类型是具有挑战性的。传统方法要么通过质谱（MS），要么使用连接特异性抗体进行Western blot。LifeSensors开发了一种更明确的方法，通过在免疫印迹分析之前使用连接特异性DUB来证明蛋白质的多泛素化连接类型。经过K63特异性DUB处理后，未修饰POI对应的条带信号增加，清楚地表明该蛋白被K63多泛素化。

艾美捷[干冰]K63连接特异性UbiTest-琼脂糖管洗脱试剂盒：

货号：UM-0413-6300

分类：试管：泛素亲和力矩阵，UbiTest

标签：试剂盒和平板，试管：泛素亲和基质

组成：

除了泛选择性UbiTest琼脂糖洗脱试剂盒的组分外，该试剂盒还包含：  

K63连接特异性DUB：35 ug，10 uM  

应用：

从细胞和组织提取物中方便地一步下拉多泛素化蛋白  

分离多泛素化蛋白用于蛋白质组学研究  

确认目标蛋白的多泛素化及其连接类型  

真正证明多泛素化——无需质谱  

方便比较处理样本之间的多泛素化水平  

方便对多个POI进行筛选  

无需底物纯化

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[干冰]线性四聚泛素，功能独特，优化实验结果

这种链不被线性链特异性单克隆抗体LUB-9识别，也不被线性链特异性去泛素化酶Otulin（又名Gumby）切割。

许多细胞过程通过在目标蛋白上生成和附着多泛素（polyUb）链来调节。越来越多的证据表明，通过一个泛素的C末端与另一个泛素的N末端之间的线性肽键连接的多泛素链在功能上发挥重要作用。负责生成线性多泛素链的酶复合体被称为LUBAC，由HOIL-1L和HOIP组成。这类链具有开放的构象，类似于K63连接的多泛素链，但功能特性非常独特。线性多泛素链可被去泛素化酶CYLD、USP5（IsoT）和USP2切割，并且已被证明可以结合许多泛素结合域（UBDs），包括NEMO和Trabin-n（3xnzf）。这些特定的链不会被线性特异性去泛素化酶Otulin切割，因此可以作为对照使用。这种重组四泛素以线性链形式表达，每个泛素分子的N末端和C末端通过酰胺键连接。该分子在最远端泛素的N末端带有His标签。

艾美捷[干冰]线性四聚泛素：

货号：SI-0104-0100

物种：人  

来源：大肠杆菌  

标签：His6  

分子量：34,617.5 Da  

数量：100 ug  

浓度：可变  

配方：20 mM Tris pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM EDTA  

储存条件：-80°C，避免反复冻融   

请注意：这些线性泛素链通过基因工程去除了每个泛素单元之间的甲硫氨酸残基，即Gly76直接与Gln2连接。因此，它们不被线性链特异性单克隆抗体LUB-9识别，也不被线性链特异性去泛素化酶Otulin（又名Gumby）切割。

参考图片：

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[干冰]连接特异性UbiTest-磁珠管洗脱试剂盒，真正证明多泛素化，无需质谱

UbiTest试剂盒用于确定目标蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台改进了研究蛋白质泛素化最常用的方法：免疫沉淀和Western blot分析。然而，在免疫印迹步骤中，底物抗体常常与底物的多泛素化形式相互作用不同。这是由于表位遮蔽、亲和力降低或选择性变化所导致的。一种更明确的证明蛋白质泛素化的方法是，在免疫印迹分析之前，将免疫沉淀与广谱去泛素化酶（DUB）消化相结合。经过DUB处理后，目标蛋白（POI）的信号增加，这清楚地表明该蛋白已被泛素化，即使在未处理的样本中没有明显的反应性也是如此。为了避免由于POI免疫反应性变化而可能产生的问题，UbiTest检测利用TUBEs来下拉多泛素化蛋白。TUBEs（串联泛素结合实体）是经过工程改造的串联泛素结合结构域，其对四泛素的解离常数在纳摩尔范围内。TUBE1已被证明能够结合所有8种连接类型。

确定目标蛋白上多泛素化的连接类型是具有挑战性的。传统方法要么通过质谱（MS），要么使用连接特异性抗体进行Western blot。LifeSensors开发了一种更明确的方法，通过在免疫印迹分析之前使用连接特异性DUB来证明蛋白质的多泛素化连接类型。经过K48/K63特异性DUB处理后，未修饰POI对应的条带信号增加，清楚地表明该蛋白被K48/K63多泛素化。

艾美捷[干冰]连接特异性UbiTest-磁珠管洗脱试剂盒#UM-0412M-1000组成：

除了泛选择性UbiTest磁珠洗脱试剂盒的组分外，该试剂盒还包含：  

K48连接特异性DUB：25 ug，10 uM  

K63连接特异性DUB：35 ug，10 uM  

应用：

从细胞和组织提取物中方便地一步下拉多泛素化蛋白  

分离多泛素化蛋白用于蛋白质组学研究  

确认目标蛋白的多泛素化及其连接类型  

真正证明多泛素化——无需质谱  

方便比较处理样本之间的多泛素化水平  

方便对多个POI进行筛选  

无需底物纯化

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[干冰]HDM2蛋白，助力酶动力学、筛选抑制剂研究

HDM2是一种E3泛素蛋白连接酶，是p53肿瘤抑制蛋白的关键调节因子。HDM2可以通过靶向p53肿瘤抑制蛋白促使其在蛋白酶体中降解，从而促进肿瘤形成。研究表明，HDM2具有作为自身和p53的泛素蛋白连接酶的功能。此外，还证明了HDM2可以通过依赖RING指结构域的方式介导其E3连接酶活性。HDM2与E1和E2结合使用，可用于研究酶动力学、筛选抑制剂以及进行选择性分析。

艾美捷[干冰]HDM2蛋白：

货号：UB-0313-0020

分子量：68 kDa（带标签时约为80 kDa）  

数量：20 ug  

物理状态：液体，1X PBS，10%甘油  

物种：人  

来源：大肠杆菌  

标签：His6-HA-Smt3  

活性：该酶在体外自身泛素化实验中具有活性。  

储存条件：-80°C。避免反复冻融。

图片参考：

左图：SDS-PAGE分析：对纯化的HDM2进行SDS-PAGE分析。将2 ug蛋白加载到10-20%的SDS-PAGE凝胶中，并用考马斯亮蓝染色。

右图：HDM2活性检测：12.5 nM的HDM2在TR-FRET实验中表现出强大的E3连接酶活性。

文献参考：

1. Koo, N., et al., Int J Mol Sci., 2022. 23(9):5005

2. Zhu, H., et al., J Hematol Oncol., 2022. 15(1):91

https://www.amyjet.com/products/LSS-UB-0313-0020.shtml

[干冰]PA770-PROTAC CRBN/兔源，高灵敏度测试PROTAC和分子胶（MGs）的活性

蛋白质降解靶向嵌合体（PROTACs）作为一种新型治疗手段，已经出现，用于靶向那些难以成药的蛋白质组。

PROTACs是一种异双功能小分子，能够同时与目标蛋白和泛素（Ub）E3连接酶结合。这一过程随后导致目标蛋白的泛素化和降解。体外泛素化试剂盒已经开发出来，用于建立一种高通量方法，通过监测蛋白质自身被泛素化的能力，准确预测PROTAC的效率。lifesensors提供这种试剂盒，用于三种E3泛素连接酶：Cereblon、VHL和HDM2，以监测PROTAC介导的泛素化作用，针对用户选择的目标蛋白。

艾美捷[干冰]PA770-PROTAC CRBN/兔源#PA-0770-P100R组成： 

体外泛素化实验板：1块  

实验缓冲液（10X）：1.2 mL  

E3混合液（20X）：1 x250 uL  

E1-E2-泛素化混合液（20X）：1 x250 uL  

二抗（抗小鼠或抗兔HRP偶联抗体）：60 uL（100X）  

检测试剂1（DR1）：1 mL  

检测试剂2（DR2）：1 mL  

封闭浓缩液（5X）：5 mL  

DMSO中的PROTAC：10 uL  

目标蛋白阳性对照BRD3（20X）：20 uL  

抗BRD3抗体（100X）：5 uL  

抗小鼠HRP偶联抗体（100X）：5 uL  

二抗：小鼠、兔  

PROTAC 体外泛素化试剂盒：

PA:770 Cereblon试剂盒  

PA:770 VHL试剂盒  

PA:770 HDM2试剂盒  

PA:770 ITCH试剂盒  

PA:770 CHIP试剂盒  

应用：

测试PROTAC和分子胶（MGs）的活性。  

比较多种PROTAC变体之间的差异，并从UbMax建立预测性的DC50值。  

选择所有三种连接酶，比较PROTACs/MGs的活性，以证明其选择性。  

测试PROTAC的底物特异性和亚型选择性。

https://www.amyjet.com/products/LSS-PA-0770-P100R.shtml