PhosphoWorks 发光测定ATP测定试剂盒*稳定发光*货号21609

适用仪器

发光酶标仪  

推荐孔板: 白色孔板

实验方案

操作步骤

简要概述

1.用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制备细胞（样品）

2.加入等体积的ATP工作溶液（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）

3.在室温下孵育10-20分钟

4.监测发光强度

溶液制备

1.将整瓶10 mL反应缓冲液（组分C）转移到ATP（组分B）中并充分混合。

2.将20μLATP监测酶（组分A）加入到组分B + C的瓶中并充分混合以制备ATP工作溶液。 注意：避免来自外源生物来源的潜在污染。

有关细胞样品制备的指南（点击查看）

样品试验方案

1运行ATP测定：

1.1用测试化合物处理细胞（或样品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37℃，5％CO 2培养箱中孵育所需的一段时间，例如24,48或96小时。

1.3向每个孔中加入100μL（96孔板）或25μL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5用标准发光计监测发光强度。

2.生成标准ATP校准曲线：

        如果需要计算样品中ATP的量，则应与上述分析一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）用于测量背景发光，在含有0.1％BSA的PBS缓冲液中制备一系列ATP稀释液。注意：通常ATP浓度从1 nM到10μM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液加入空板中（对于96孔板为100μL或对于384孔板为25μL）。

2.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5用标准光度计监测发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RLU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 我们建议使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下位置找到：

图1.使用PhosphoWorks发光ATP检测试剂盒测量ATP剂量反应。 以1秒间隔监测10μM至0.1nM的ATP浓度长达5小时。