Amplite 荧光法肾素检测试剂盒 红色荧光货号13530

产品概述

Amplite 荧光法肾素检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于β-半乳糖苷酶的试剂盒，肾素是一种酶，参与人体的肾素-血管紧张素系统（RAS），介导细胞外体积和动脉血管收缩。它调节血压和电解质的稳态。血管紧张素II收缩血管，导致血压升高。它还会增加ADH和醛固酮的分泌，并刺激下丘脑口渴反射。肾素-血管紧张素系统过度活跃会导致血管收缩以及钠和水的滞留。肾素已被确定为高血压的有吸引力的靶标。 Amplite 肾素检测试剂盒使用我们专有的Tide Fluor 3（TF3）/ Tide Quencher 3（TQ3）荧光共振能量转移（FRET）肽，为高通量筛选肾素抑制剂和肾素活性提供了便捷的检测方法。在FRET肽中，TF3的荧光被TQ3淬灭。通过肾素裂解为两个单独的片段后，TF3的荧光得以恢复，荧光信号可以通过荧光酶标仪监测。该测定法比基于EDANS / DABCYL的测定法灵敏度高约五十倍。借助Amplite 肾素检测试剂盒，我们在100 μL反应体积中检测到低至1ng的肾素。但是，试剂盒中使用的肾素底物的选择性尚未经过彻底测试。由于基于肽的蛋白酶底物通常具有低选择性，因此它也可能对其他蛋白酶有反应。百萤生物是AAT Bioquest的代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法肾素检测试剂盒 红色荧光 。 

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适用仪器

荧光酶标仪  

Ex: 540nm

Em: 590nm

Cutoff: 570nm

推荐孔板: 纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.添加适当的对照或测试样品（50 μL）

2.加入Renin Red 底物工作溶液（50 μL）

3.在37°C的培养箱中孵育30-60分钟（用于终点读数）

4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

肾素标准

向487.5 μL的测定缓冲液（组分C）中加入12.5 μL的40 μg / mL肾素标准溶液（组分B），得到1000 ng / mL的Renin标准溶液（Ren7）。 取150 μL 1000 ng / mL Renin标准溶液进行1：3连续稀释，以得到连续稀释的Renin标准液（Ren6- Ren1）。

2.工作溶液

将50μLRenin Red 底物（组分A）添加到5 mL的测定缓冲液（组分C）中，使总体积为5.05 mL。 注意：应立即使用Renin Red 底物。

样品操作及分析

表1.黑色96孔微孔板中肾素标准品和测试样品的布局。 Ren =肾素标准品（Ren1-Ren7，1至1000 ng / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品。

BL BL TS TS

Ren1 Ren1 ... ...

Ren2 Ren2 ... ...

Ren3 Ren3  

Ren4 Ren4  

Ren5 Ren5  

Ren6 Ren6  

Ren7 Ren7  

表2.每个孔的试剂组成。 注意：肾素标准品用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准品

孔 容积 试剂

Ren1-Ren7 50ul 连续稀释（1至1000 ng / mL）

BL 50ul 分析缓冲液（组分B）

TS 50ul 样品

1.根据需要准备含有肾素的生物样品。

2.根据表1和表2中提供的布局准备肾素标准品和/或含肾素的测试样品。对于384孔板，每孔使用25 μL试剂代替50 μL。

3.如果您正在筛选肾素抑制剂，则将板在酶反应所需的温度（例如25°C或37°C）下预孵育10-15分钟。

4.将50 μL（96孔）或25 μL（384孔）的Renin Red 底物工作溶液添加到样品和测定板的对照孔中。

5.将反应在37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 mn）下监控荧光强度。注意：试剂盒中使用的肾素底物的选择性尚未经过彻底测试。由于基于肽的蛋白酶底物通常具有低选择性，因此它也可能对其他蛋白酶有反应。人们可能使用肾素特异性抑制剂进行特异性测试，例如在存在肾素特异性抑制剂的情况下，底物的水解是由于非特异性蛋白酶活性。总活性和在肾素特异性抑制剂存在下的活性之间的差异给出了样品中的肾素活性。

对于动力学读数：立即开始测量荧光强度，并每5分钟连续记录数据30至60分钟。

对于终点读数：将反应液在37°C下孵育60分钟或更长时间，如果可能，请避免光照。 然后测量荧光强度。