热门词：生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜
Cat. #: AB2141 (20preps)
AB2143 (100preps）
v 试剂盒组成、储存、稳定性：﹢
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试剂盒组成 |
保存 |
20次 |
50次 |
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裂解液RL |
4℃避光 |
25 ml |
50 ml |
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去蛋白液RE |
室温 |
15 ml |
25 ml |
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漂洗液RW |
室温 |
5 ml 10 ml |
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RNase-free H2O |
室温 |
10 ml |
10 ml |
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70%乙醇 |
室温 |
4ml RNase-free H2O 9ml RNase-free H2O |
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RNase-free吸附柱RA |
室温 |
20个 |
50个 |
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收集管（2ml） |
室温 |
20个 |
50个 |
v 产品介绍：
改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶， 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
v 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
ð 提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇!
1. 取1ml裂解液RL，转入1.5ml离心管中，备用。
2. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取20-50mg细粉转入上述装有RL的离心管, 立即用手剧烈振荡20秒充分裂解（可以手动或者电动匀浆提高产量）。
3. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
4. 可选步骤（一般不需要）： 12，000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含多糖或是植物的块茎部分时可能需要此额外的分离步骤。
5. 每1mlRL加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
6. 于4℃12，000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
7. 加入1倍体积70％乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中（吸附柱套在收集管内）。
8. 12，000rpm 离心45秒，弃掉废液，将吸附柱重新套回收集管。
9. 加500μl 去蛋白液RE，12，000rpm 离心45秒，弃掉废液。
10. 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心45秒，弃掉废液。
11. 加入500μl漂洗液RW，12,000 rpm 离心45秒，弃掉废液。
12. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
13. 取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置2分钟， 12,000 rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。
