尔首科仪发布蜂蜜中咖啡因含量的检测高效液相色谱仪法（HPLC)

  蜂蜜中咖啡因含量的检测高效液相色谱仪法（HPLC) 咖啡因，白色粉末或六角棱柱状结晶，咖啡因是一个中枢神经系统兴奋剂，也是一个新陈代谢的刺激剂。咖啡因既被作为饮品，也被作为药品，其作用都是提神及解除疲劳，咖啡因开始能使中枢神经系统兴奋，因此能够增加警觉度，使人警醒，有快速而清晰的思维，增加注意力和保持较好的身体状态。在长期摄取的情况下，大剂量的咖啡因是一种毒品，能够导致“咖啡因中毒”。咖啡因中毒包括上瘾和一系列的身体与心理的不良反应，比如神经过敏，易怒，焦虑，震颤，肌肉抽搐（反射亢进），失眠和心悸 （一般人服用咖啡因是因为它的刺激作用，许多学生在应付考试时及做夜班的人均会服用咖啡因药片。在而在严格的上瘾的定义下，只有逐渐增高用量才是上瘾，用咖啡因依赖描述更为恰当一些，但是在一个被广泛接受的定义下，所有慢性的很难摆脱的行为都叫做上瘾，所以也可以用咖啡因上瘾来描述。）另外，由于咖啡因能使胃酸增多，持续的高剂量摄入会导致消化性溃疡，糜烂性食道炎和胃食管反流病。控制好咖啡因的含量是一个必要的过程。
1.试剂
  乙睛:色谱纯
  冰乙酸:99.9%
  三氯甲烷。
  氢氧化钠溶液:称取5.0g氢氧化钠用100mL水溶解。
2.标准溶液的制备
  咖啡因标准品:纯度≥99.5%
  咖啡因贮备液（1mg/ml）：准确称取0.1g（准确至0.0001g）咖啡因标准品，用水溶解并定容至100ml。
3.试样溶液制备
  准确称取20g（准确至0.01g）试样于50ml具塞离心管中，加人10ml氢氧化钠水溶液混匀，然后定量加入20.0 m L三氯甲烷，加塞，在旋涡混匀器上混匀5min。于2000r/min离心5min，将上层水相用尖嘴吸管吸取弃去，有机相再用2×5mL的氢氧化钠水溶液洗涤两次，弃去水相；将有机相在旋涡混合器上混匀，用干燥滤纸过滤，弃去初液3ml，收集滤液，定量取滤液10.0ml，于45℃空气流下浓缩至近干，定量加人2.0mL水溶解残渣，过0.45um微孔滤膜后，外标法定量。
4.色谱条件
 ⑴色谱柱：C18柱，VERTEX  C18柱4.6*250mm*5um ⑵流动相：乙睛:水:乙酸(16+83+1);
 ⑶流速：0.50mL/min;
 ⑷检测波长：273nm;
 ⑸进样量：20ul
 ⑹柱温：40.0℃
5.仪器
   水浴超声波，高效液相色谱仪LC-10Tvp，紫外检测器SPD-10Tvp，振动器，  
   真空泵，过滤装置，旋涡混合器等
6.谱图
  标准品谱图