禽(鸡)大肠杆菌病实验室诊断

大肠杆菌病实验室诊断
禽大肠杆菌病是由致病性埃希氏大肠杆菌引起的多种禽病的总称，主要发生于幼禽，包括鸡、鹅、鸭、火鸡和肉鸽等。我国各地都有该病的流行报告，发生较多，也较难防制。家禽感染大肠杆菌后，由于大肠杆菌的致病力、感染的途径和家禽的年龄、抵抗力不同，可以产生许多和病变不同的病型：大肠杆菌性败血症；气囊炎；腹膜炎、卵黄性腹膜炎；全眼球炎；大肠杆菌性肉芽肿；脐炎； 滑膜炎；输卵管炎待。

（一）、病料采集

败血型的心、心血、肝；感染的鸡胚；脐炎的卵黄物质；眼型的眼内脓性或干酪样物；关节炎的关节脓液；输卵管炎、腹膜炎的干酪样物等。

（二）、检验程序

1．染色镜检 用铂金耳以无菌操作的方法抹片或直接触片，革兰氏染色、镜检可见两端钝圆，成对或单个存在的阴性短杆菌。

2．分离培养 将病料划线接种于普通琼脂培养基、肉汤培养基、远滕氏培养基、麦康凯培养基或伊红美蓝琼脂平板上，37℃温箱中培养24h观察可见如下结果：

培养基 培养时间（h） 结果观察

普通肉汤 18—24 肉汤均匀混浊，管底有粘性沉沉，表面有菌环

普通琼脂培养基 24 边缘整齐，表面光滑、湿润、低而隆凸的无色菌落

远滕氏培养基 同上 深红色、具金属光泽、中等大小、不透明、边缘整齐、表面光滑、湿润、低凹的圆形菌落

麦康凯培养基 同上 粉红色菌落

伊红美蓝琼脂培养基 同上 深紫色、隆凸、表面湿润、发有蓝绿色金属光泽
 

3．生化试验

从麦康凯或远滕氏培养基上，挑取单个可疑菌落接种于生化培养基中，37度培养24—72h后，观察结果。大肠杆菌的生化特性如下表：

项 葡 乳 麦 甘 蔗 山 阿胶 鼠 硫 明 M V 尿 枸 靛 蛋

目 萄 糖 芽 露 糖 梨 拉糖 李 化 胶 R P 素 橼 基 白

糖 糖 醇 醇 伯 糖 氢 酸盐 质 胨水
 

结 ⊕ ⊕ ⊕/X ⊕ ⊕/- ⊕ ⊕ ⊕ - - + - - - + +

果
 

注：⊕表示产酸产气；⊕/-表示部分菌株能发酵；-表示阴性；+表示能利用或阳性；⊕/X表示发酵迟缓。

4.致病性试验（动物试验）

是用来判断分离出来的大肠杆菌是致病性的，还是非致病性的，以及大肠杆菌的毒力如何？

（1）用大肠杆菌24h的肉汤纯培养物，给3--5日龄的雏鸡腹腔注射，0.2—0.3ml/只；（2）用灭菌生理盐水轻轻洗去麦康凯平板培养物1：10稀释，给小白鼠腹腔注射，0.2ml/只。然后观察实验动物的发病和死亡情况，从而判断大肠杆菌是否具有致病性，进而根据死亡只数及时间来判断大肠杆菌毒力的强弱。期间设对照组。

5.注射菌种的回收 取死亡小白鼠和雏鸡的组织、触片、染色、镜检及划线接种，应分离到与接种菌完全一致的病原菌。

6．血清型鉴定

（1）菌体抗原的制备 取经形态学检查、培养特性检查和生化试验鉴定为致病性的大肠杆菌，接种于普通琼脂平板上，37度培养24h后，用0.5ml体积分数0.5％石炭酸生理盐水（即0.5ml石炭酸加99.5ml生理盐水）洗下，并收集于青霉素瓶中121度加热处理2h，以破坏其K抗原。

（2）单价O因子血清可到有关的生物制品研究所购买。

（3）O因子血清凝集试验 先将冻干的O因子血清用0.5％石炭酸生理盐水作5倍（4—8倍）稀释，用微量加样器吸取15微升单因子血清于分别滴于玻板上，后用铂金耳钓取经处理的大肠杆菌菌体抗原一环与因子血清混合，同时作盐水对照，观察有无自凝现象，半分钟后，若有凝集颗粒出现，则判为阳性，5min内不出现凝集颗粒者判为阴性。