内参抗体种类选择

内参即是内部参照（Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达水平相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting中使用内参对应的抗体来检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中 的表达相对恒定，借此，可检测每个样品内参的量继而可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用 内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

常用的蛋白质内参有GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)禾口细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。

His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸 附纯化。由于分子量较小，并且 较容易分离和纯化，His融合标签与其他标签相比有很多明显优势，是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。利 用His标签可以建立一个基于融合蛋白的高效检测和纯化系统。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞 内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。

GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可 从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层折得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解，从而除去GST蛋 白。

GFP标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等，相应的 GFP标签抗体也被广泛应用。

Myc标签（序列为：EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在 细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。