鸡α干扰素(IFN-α)酶联免疫分析试剂盒的操作使用

鸡α干扰素(IFN-α)酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

1pg/ml-60pg/ml

使用目的：

鸡α干扰素(IFN-α)酶联免疫分析试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中α干扰素(IFN-α)含量。

实验原理

鸡α干扰素(IFN-α)酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡α干扰素(IFN-α)水平。用纯化的鸡α干扰素(IFN-α)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α干扰素(IFN-α)，再与HRP标记的α干扰素(IFN-α)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α干扰素(IFN-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡α干扰素(IFN-α)浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	标准品（120pg/ml）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×8条	9	标准品稀释液	1.5ml×1瓶
4	样品稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.         标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60pg/ml	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
30pg/ml	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
15pg/ml	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5pg/ml	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
3.75pg/ml	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂 （来源： 上海劲马生物科技有限公司 ）