SSH消减cDNA文库构建

特点
? 快速获取两个不同生物材料中差异表达基因
? 显著增加了获得低丰度表达差异的cDNA的概率，简化了消减文库的分析
? 灵敏度高，假阳性率低
原理
抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization，SSH)是依据消减杂交和抑制PCR发展出来的一种分离差异表达基因的新方法，主要用于分离两种细胞或两种组织的细胞中的差异表达基因。它主要是利用抑制PCR对差减杂交后丰度一致的目的材料中两端连有不同接头的差异表达片段进行指数扩增，而两端连接上同一接头的同源双链片段仅呈线形扩增，从而达到富集差异表达基因的目的。
服务流程
1) 以约2ug的mRNA为模板合成cDNA(双链cDNA)
2) 对双链cDNA进行酶切，酶切后产物（Tester）与接头进行偶联
3) Tester与Driver进行消减杂交
4) 进行抑制性PCR反应
5) PCR产物的纯化
6) 与T载体连接，连接产物转化感受态细胞DH10B
7) 随机挑取24个克隆子并抽提质粒，酶切后电泳以检测含插入片段的克隆子比例
客户提供
样品需求量：200～400mg组织或10^7细胞
我们提供
提供实验报告及构建于T载体的差异文库（涂布后的平板）；48个（双向）克隆的PCR鉴定。