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abs9116 Lysis Buffer for WB/IP Assays
abs9116 Lysis Buffer for WB/IP Assays
价 格：360
产 地：上海更新时间：2025/10/14 11:19:37
品 牌：absin型 号：abs9116
状 态：正常点击量：681
联 系 人：爱必信
电 话：021-38015121
传 真：021-38015121
等 级： (第 16年)
性 质：生产型,服务型,
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产品介绍
| 描述 | 本免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（Lysis Buffer for WB/IP Assays）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为 20mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于 PAGE，蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。 |
| 别名 | 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 |
| 使用方法 | 1、培养的细胞样品
1）充分融解 WB/IP 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（100mM），使其最终浓度为 1mM。
2）贴壁细胞：吸除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略此步）。按照六孔板的每孔细胞加入 100-200μl 裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。裂解 15-30 分钟，通常裂解液接触细胞 1-3 秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。大团细胞比较难裂解充分，少量细胞则由于接触充分，先对比较容易充分裂解。
3）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫共沉淀等实验。
【裂解液用量说明】：通常 6 孔板每孔细胞加入 100μl 裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150μl 或 200μl。
2、组织样品
1）将组织剪切成细小的碎片。
2）充分融解 WB/IP 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入 PMSF（100mM），使其最终浓度为 1mM。
3）按照每 20mg 组织加入 100-200μl 裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。】
4）用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5）充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫共沉淀等实验。
如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分，之后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。 |
