1、对于培养细胞样品
1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
2）对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没
有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，
使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后，细胞就会被裂解。
3）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200μL
裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成 5~10×105 细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少
量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4）充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫
沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
注：裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100μL 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常
高可以适当加大裂解液的用量至 150μL 或 200μL。
2、对于组织样品
1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
2）把组织剪切成细小的碎片。
3）按照每 20mg 组织加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加
更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫
沉淀和免疫共沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品
裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆
器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。