mRNA Vaccinia Capping Enzyme,Animal Free,Antibiotic Free
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
mRNA Vaccinia Capping Enzyme,Animal Free,Antibiotic Free | 10614ES84 | 2000 U | 4265 |
10614ES92 | 10000 U | 17825 |
10614ES94 | 20000 U | 29825 |
产品描述
真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1和D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5'末端(m7Gppp5'N)。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,并且保证正确的方向。
本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供,可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应,。
产品性质
来源(Source) | 携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
最适温度(Optimum Temperature) | 37℃ |
宿主核酸残留 | <1fg/U |
宿主蛋白残留 | <50ppm |
病原体(HBV/ HCV/HIV)检测 | 无检出 |
内毒素残留 | <0.05EU/1000U |
支原体检测 | 无检出 |
无菌检测 | 无检出 |
储存缓冲液(Storage Buffer) | 20 mM Tris-HCl pH 8.0,100 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100,50%甘油 |
活性单位定义(Unit Definition) | 37℃条件下,1小时内将10 pmol GTP(α- 32P)掺入到一条含80个核苷酸(80 nt)转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。 |
注:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编码/规格 |
10614ES84 (2000 U) | 10614ES92 (10000 U) | 10614ES94 (20000 U) |
10614-A | 10×Capping Buffer | 500 μL | 1.25 mL×2 | 1.25 mL×4 |
10614-B | Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL) | 200 μL | 1 mL | 1 mL×2 |
运输和保存方法
冰袋运输,-20℃保存,有效期1年。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
2)所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬;
3)在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构;
4)对于已知5'末端结构的RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率;
5)5'末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反应(反应体系20 μL)
本步骤适用于10 μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。
1)取10 μg RNA至1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至15 μL;
2)65℃加热5分钟;
3)取出离心管置于冰上5分钟;
4)依次加入以下组分:
组分 | 体积 |
上述变性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP(10 mM) | 1.0 μL |
SAM(2 mM) | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL) | 1.0 μL |
【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0;50 mM KCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT。
5)37°C孵育30分钟;
6)RNA加帽完成,可进行后续实验。
2. 5'末端标记反应(反应体系20 μL)
本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大,其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。
1)取适量RNA到1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至14 μL;
2)65℃加热5分钟;
3)取出离心管置于冰上5分钟;
4)依次加入以下组分:
组分 | 体积 |
上述变性的RNA | 14.0 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM(2 mM) | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL) | 1.0 μL |
【注】:GTP mix为GTP和少量标记物,其中GTP使用浓度参照注意事项5)。
5)37°C孵育30分钟;
6)RNA 5'末端标记完成,可进行后续实验。
HB201020