来宝网Logo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

山东博科
现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>DNA提取纯化>EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆
EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆
EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆
  • EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆

EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆

产品报价:200元

更新时间:2020/3/24 8:56:19

地:北京

牌:金克隆

号:EX1113

厂商性质:

公司名称: 金克隆(北京)生物技术有限公司

产品关键词: 无内毒素质粒小提   无内毒素质粒小量提取   金克隆   无内毒素质粒提取  

147
访问人数
0
累计评论


黄晶丽 : (13341101640) (01059770309)

(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)


无内毒素质粒小量提取试剂盒说明书

货号:EX1113

规格:50T/100T

保存:常温干燥保存,复检期为一年。RNase A -20℃保存;内毒素清除剂2-8℃保存。

试剂盒内容:EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆

名称

50T

100T

Storage

RNase   A

300ul

500ul

-20

内毒素清除剂

20ml

40ml

2-8

溶液P1

10ml

20ml

RT

溶液P2

10ml

20ml

RT

溶液P3

10ml

20ml

RT

溶液P4

30ml

60ml

RT

漂洗液

15ml

15ml×2

RT

洗脱液

15ml

30ml

RT

吸附柱

50

100

RT

收集管

50

100

RT

说明书

1

1

——

注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用前先将试剂盒中提供的RNaseA全部加入,混匀,置于 2-8保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

产品说明:EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆

       本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。公司研制的内毒素清除剂,可最大限度地除去内毒素。从1-5ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取5-15μg高纯度质粒DNA,提取率达85-90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的实验,以及其他各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

操作步骤:EX1113-50T 无内毒素质粒小量提取试剂盒 金克隆

1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,吸除上清(菌液浓度较低时可多次离心收集到一个离心管中)。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA,使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入200ul溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入200ul溶液P3,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10 min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。注意:溶液P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5、加入上清1/5体积的冰上预冷的内毒素清除剂,振荡混匀,溶液变浑浊,冰浴2min至溶液变清亮。

637水浴5min,不时振荡,溶液又变浑浊。12000rpm室温离心5min,溶液应分为两相,上层水相含质粒DNA,下层油相含内毒素。(温度低时,内毒素清除剂无法分相,因此必须至少 20℃以上室温离心或者保证冬季转头温度 20℃以上)

7、将含质粒DNA的上层水相转移至新管,弃下层油相,注意不要吸入油状相。重复步骤5-7三次。

8、加入600ul的溶液P4,充分混匀后加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。

9、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

10、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

1112000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

12、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul65水浴预热的洗脱液,室温放置2min12000rpm离心1min

13、为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心1min

注意事项:

1. 使用前请先检查溶液P2P3P4是否出现混浊,如有混浊现象,可在37水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。

2. 洗脱缓冲液体积不应少于50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围) pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20,以防DNA降解。

3. 质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于质粒DNA本身的性质,清除过程可导致部分质粒DNA丢失,但内毒素却能得到最大限度清除。

4. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压处理。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。

EX1110

质粒小量提取试剂盒

EX1113

无内毒素质粒小量提取试剂盒

EX1120

质粒大量提取试剂盒

EX1123

无内毒素质粒大量提取试剂盒

EX1210

革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

EX1220

革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒

EX1310

酵母质粒提取试剂盒

EX1100

革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒   

EX1150

细菌基因组DNA提取试剂盒

EX1300

酵母基因组DNA大量提取试剂盒   

EX1350

酵母基因组DNA提取试剂盒

EX1355

真菌基因组DNA提取试剂盒

EX1450

植物基因组DNA提取试剂盒

EX1550

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

EX1650

全血基因组DNA提取试剂盒

EX1652

全血基因组DNA提取试剂系统

EX1750

土壤基因组DNA提取试剂盒

EX1752

粪便基因组DNA提取试剂盒

EX1754

DNA病毒基因组提取试剂盒

EX1784

RNA病毒基因组提取试剂盒

EX1850

通用基因组DNA提取试剂盒

EX0108

DNA提取液(25:24,pH>7.8

EX0118

DNA提取液(125:24:1,pH>7.8

EX1800

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

EX1802

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

EX1804

DNA产物纯化试剂盒