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EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆
EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆
  • EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆

EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆

产品报价:380元

更新时间:2020/3/24 9:24:11

地:北京

牌:金克隆

号:EX1220

厂商性质:

公司名称: 金克隆(北京)生物技术有限公司

产品关键词: 革兰氏阳性菌质粒提取   质粒大量提取   金克隆  

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革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒说明书

货号:EX1220

规格:10T

保存:RNA酶,溶菌酶于-20 保存,其它试剂室温保存。复检期一年。

试剂盒组成:EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆

名称

10T

RNase A

1ml

溶菌酶

10ml

溶液

60ml

溶液

60ml

溶液

80ml

漂洗液

15ml×2

洗脱液

30ml

吸附柱

10

收集管

20

 注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入),混匀,置于 2-8保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤(仅供参考):EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆

1、  50-200ml 细菌培养物,11000rpm离心5min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2、  向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml 溶液1ml 溶菌酶,混匀。37水浴30 min 以上(根据菌液量可适当加长水浴时间,请先检查溶液是否已加入 RNaseA),使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、  向离心管中加入 5ml 溶液,温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和以免污染基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。

4、  向离心管中加入 7ml 溶液,立即温和地上下翻转 6-8 次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。11000rpm离心10 min ,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。注意:溶液加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

5、  将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室温放置2min11000rpm 离心2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中( 如果一次加不完,可分两次吸附)

6、  向吸附柱中加入7ml 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入7ml 漂洗液,11000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、  11000rpm离心5min,将吸附柱敞口置于室温或 50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。

9、  将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 1-2ml 65水浴预热的洗脱液,室温放置5min11000rpm离心2min,收集质粒DNA溶液。

10、            (可选)为了增加质粒的回收率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置5min11000rpm离心2min

注意事项:EX1220-10T 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 金克隆

1、  使用前请先检查溶液和溶液是否出现混浊,如有混浊现象,可在 37水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。

2、  洗脱缓冲液体积不应少于500ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH值在8.0左右( 可用NaOH 将水的pH值调至此范围) pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20 ,以防DNA降解。

3、  如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用400-800ml过夜培养物,同时按照比例增加溶液、溶液和溶液的用量,吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。

4、  DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA40 μg/ml 单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9 ,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离---子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

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