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YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
  • YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

产品报价:3980元

更新时间:2020/1/20 11:42:55

地:上海

牌:R&D

号:YS-0000108

厂商性质:

公司名称: 上海一研生物科技有限公司

产品关键词: YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒   无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒   无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒  

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黄先生 : (15021460884) (021-69985186)

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YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

品RNA的抽提


①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。


②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。


③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。


④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。


⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。


⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。

YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒NA质量检测:


无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒检测1)紫外吸收法测定


先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。


浓度测定


A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。具体计算如下:


RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀释至495的TE中,测得A260 = 0.21


RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g


取5ul用来测量以后,剩余样品RNA为35 l,剩余RNA总量为:


35 l × 0.84 gl = 29.4 g


②纯度检测


YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度,比值范围1.8到2.1。


2)变性琼脂糖凝胶电泳测定


①制胶


1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。


10×MOPS电泳缓冲液


浓度 成分


0.4M MOPS,pH 7.0


0.1M 乙酸钠


0.01M EDTA


灌制凝胶板,预留加样孔至少可以加入25 l溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。


YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒服务流程:


1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针(染料法只需设计引物)


2、抽提DNA、RNA,并对RNA进行逆转录


3、实时荧光定量PCR


4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)


5、返还样品(引物、RNA和cDNA)

NA质量检测:


无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒检测1)紫外吸收法测定


先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。


浓度测定


A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。具体计算如下:


RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀释至495的TE中,测得A260 = 0.21


RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g


取5ul用来测量以后,剩余样品RNA为35 l,剩余RNA总量为:


35 l × 0.84 gl = 29.4 g


②纯度检测


RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度,比值范围1.8到2.1。


2)YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒变性琼脂糖凝胶电泳测定


①制胶


1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。


10×MOPS电泳缓冲液


浓度 成分


0.4M MOPS,pH 7.0


0.1M 乙酸钠


0.01M EDTA


灌制凝胶板,预留加样孔至少可以加入25 l溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。



使用方法:


一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)


1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。


2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。


3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。


4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。


5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。


6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。


7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。


二、样品DNA的制备


8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。


9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。


三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)


10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。


11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)

YS-0000108无色杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒注意事项:


1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。


2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。


3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。


4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。


5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


保存方式


冰袋运输。-20℃避光储存,有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。