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Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® 12611ES02
Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® 12611ES02
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Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® 12611ES02

产品报价:1493元

更新时间:2019/6/24 14:19:40

地:上海

牌:翊圣生物

号: 12611ES02

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

产品关键词: 二代测序建库   NGS   Illumina  

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Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for   Illumina? Set1

12611ES02

48×2   T

1493.00

Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for   Illumina? Set2

12612ES02

48×2   T

1493.00

产品描述

Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,共分为2Set,每个Set包含48Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96Index Primer适用于Illumina?高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12611ES02

PE Adapter

336 μL

Universal Primer

240 μL

Index Primer 1-48

5 μL each

12612ES02

PE Adapter

336 μL

Universal Primer

240 μL

Index Primer 49-96

5 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

注意事项

1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3. 本试剂盒每个Set包含48Index Primer,每种Index Primer可以构建2DNA文库,每个Set可以构建96DNA文库。

4. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃

5. 使用Hieff NGS? 96 Single Index Primers Kit for Illumina?试剂盒构建的DNA文库结构如下:

 

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina? 试剂盒操作说明进行。

接头连接(Adapter Ligation):

在末端修复产物两端连接特定的Illumina?接头,即Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?操作步骤3.2

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

推荐Adapter(15 μM)使用量

400 ng

30:1

3.5 μL

300 ng

40:1

3.5 μL

200 ng

60:1

3.5 μL

100 ng

100:1

3.0 μL

50 ng

100:1

1.5 μL

【注】:Input DNA 摩尔数(pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度(bp]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

3. 配制表2所示反应体系;

2. Adapter Ligation反应体系

名称

体积(μL

dA-tailed   DNA

60

Ligation   Enhancer

30*

Quick   T4 DNA Ligase

5

PE   Adapter

x**

ddH2O

5-x

【注】:*Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示,计算接头用量

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

5. PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:

3. Adapter Ligation反应程序

温度

时间

热盖

Off

20°C

15   min

4°C

Hold

【注】:Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的AdapterAdapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS? MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?建库试剂盒说明书。

文库扩增(Library Amplification

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系;

 

 

 

 

4. PCR扩增反应体系

名称

体积(μL

2× Super Canace?High-Fidelity   Mix

25

Universal Primer

2.5

Index Primer

2.5

Adapter Ligated   DNA

20

【注】:文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

4. PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

5. PCR扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

1 min

1

98°C

10 sec

根据实验需要调整

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

-

序列信息

PE Adapter for Illumina

5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTC -3′

5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3′

Universal Primer for Illumina

5′-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3′

Index Primer for Illumina

5′-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3′

xxxxxxxx表示8 bp Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

 

Index Primer名称

引物中Index序列

测序对应Index序列

Index Primer名称

引物中Index序列

测序对应Index序列

Index Primer 1

ATCACGTT

AACGTGAT

Index Primer 25

TGCGATCT

AGATCGCA

Index Primer 2

CGATGTTT

AAACATCG

Index Primer 26

TTCCTGCT

AGCAGGAA

Index Primer 3

TTAGGCAT

ATGCCTAA

Index Primer 27

TAGTGACT

AGTCACTA

Index Primer 4

TGACCACT

AGTGGTCA

Index Primer 28

TACAGGAT

ATCCTGTA

Index Primer 5

ACAGTGGT

ACCACTGT

Index Primer 29

TCCTCAAT

ATTGAGGA

Index Primer 6

GCCAATGT

ACATTGGC

Index Primer 30

TGTGGTTG

CAACCACA

Index Primer 7

CAGATCTG

CAGATCTG

Index Primer 31

TACTAGTC

GACTAGTA

Index Primer 8

ACTTGATG

CATCAAGT

Index Primer 32

TTCCATTG

CAATGGAA

Index Primer 9

GATCAGCG

CGCTGATC

Index Primer 33

TCGAAGTG

CACTTCGA

Index Primer 10

TAGCTTGT

ACAAGCTA

Index Primer 34

TAACGCTG

CAGCGTTA

Index Primer 11

GGCTACAG

CTGTAGCC

Index Primer 35

TTGGTATG

CATACCAA

Index Primer 12

CTTGTACT

AGTACAAG

Index Primer 36

TGAACTGG

CCAGTTCA

Index Primer 13

TGGTTGTT

AACAACCA

Index Primer 37

TACTTCGG

CCGAAGTA

Index Primer 14

TCTCGGTT

AACCGAGA

Index Primer 38

TCTCACGG

CCGTGAGA


 

Index Primer名称

引物中

Index序列

测序对应Index序列

Index Primer名称

引物中Index序列

测序对应Index序列

Index Primer 15

TAAGCGTT

AACGCTTA

Index Primer 39

TCAGGAGG

CCTCCTGA

Index Primer 16

TCCGTCTT

AAGACGGA

Index Primer 40

TAAGTTCG

CGAACTTA

Index Primer 17

TGTACCTT

AAGGTACA

Index Primer 41

TCCAGTCG

CGACTGGA

Index Primer 18

TTCTGTGT

ACACAGAA

Index Primer 42

TGTATGCG

CGCATACA

Index Primer 19

TCTGCTGT

ACAGCAGA

Index Primer 43

TCATTGAG

CTCAATGA

Index Primer 20

TTGGAGGT

ACCTCCAA

Index Primer 44

TGGCTCAG

CTGAGCCA

Index Primer 21

TCGAGCGT

ACGCTCGA

Index Primer 45

TATGCCAG

CTGGCATA

Index Primer 22

TGATACGT

ACGTATCA

Index Primer 46

TCAGATTC

GAATCTGA

Index Primer 23

TGCATAGT

ACTATGCA

Index Primer 47

TAGTCTTG

CAAGACTA

Index Primer 24

TTGACTCT

AGAGTCAA

Index Primer 48

TTCAGCTC

GAGCTGAA

 

Index Primer名称

引物中

Index序列

测序对应Index序列

Index Primer名称

引物中Index序列

测序对应Index序列

Index Primer 49

TGTCTATC

GATAGACA

Index Primer 73

GCAACATT

AATGTTGC

Index Primer 50

TATGTGGC

GCCACATA

Index Primer 74

GGTCGTGT

ACACGACC

Index Primer 51

TTACTCGC

GCGAGTAA

Index Primer 75

GAATCTGT

ACAGATTC

Index Primer 52

TCGTTAGC

GCTAACGA

Index Primer 76

GTACATCT

AGATGTAC

Index Primer 53

TACCGAGC

GCTCGGTA

Index Primer 77

GAGGTGCT

AGCACCTC

Index Primer 54

TGTTCTCC

GGAGAACA

Index Primer 78

GCATGGCT

AGCCATGC

Index Primer 55

TTCGCACC

GGTGCGAA

Index Primer 79

GTTAGCCT

AGGCTAAC

Index Primer 56

TTGCGTAC

GTACGCAA

Index Primer 80

GTCGCTAT

ATAGCGAC

Index Primer 57

TCTACGAC

GTCGTAGA

Index Primer 81

GGAATGAT

ATCATTCC

Index Primer 58

TGACAGAC

GTCTGTCA

Index Primer 82

GAGCCAAT

ATTGGCTC

Index Primer 59

TAGAACAC

GTGTTCTA

Index Primer 83

GCTCCTTG

CAAGGAGC

Index Primer 60

TCATCCTA

TAGGATGA

Index Primer 84

GTAAGGTG

CACCTTAC

Index Primer 61

TGCTGATA

TATCAGCA

Index Primer 85

GAGGATGG

CCATCCTC

Index Primer 62

TAGACGGA

TCCGTCTA

Index Primer 86

GTTGTCGG

CCGACAAC

Index Primer 63

TGTGAAGA

TCTTCACA

Index Primer 87

GGATTAGG

CCTAATCC

Index Primer 64

TCTCTTCA

TGAAGAGA

Index Primer 88

GATAGAGG

CCTCTATC

Index Primer 65

TTGTTCCA

TGGAACAA

Index Primer 89

GTGTGTCG

CGACACAC

Index Primer 66

TGAAGCCA

TGGCTTCA

Index Primer 90

GCAATCCG

CGGATTGC

Index Primer 67

TACCACCA

TGGTGGTA

Index Primer 91

GACCTTAG

CTAAGGTC

Index Primer 68

TGCGTGAA

TTCACGCA

Index Primer 92

GCCTGTTC

GAACAGGC

Index Primer 69

GGTGAGTT

AACTCACC

Index Primer 93

GCACTGTC

GACAGTGC

Index Primer 70

GATCTCTT

AAGAGATC

Index Primer 94

GCTAACTC

GAGTTAGC

Index Primer 71

GTGTCCTT

AAGGACAC

Index Primer 95

GATTCATC

GATGAATC

Index Primer 72

GACGGATT

AATCCGTC

Index Primer 96

GTCTTGGC

GCCAAGAC

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1365

 

 

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上海翊圣生物科技有限公司

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