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免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液20118ES60
免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液20118ES60
  • 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液20118ES60

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液20118ES60

产品报价:228元

更新时间:2024/3/25 11:30:24

地:上海

牌:翌圣生物

号:20118ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

产品关键词: 裂解液   免疫沉淀   免疫印迹  

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Lysis Buffer for WB/IP Assays

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Lysis Buffer for   WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

20118ES60

100 mL

228.00

产品描述

本品细胞/组织裂解液,WB/IP裂解液,是一种非变性条件下的裂解液,含有sodium pyrophosphateβ-glycerophosphateEDTAsodium orthovanadateleupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解,并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的WesternIPCo-IP等实验。

运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。-20℃保存,一年有效。尽量避免反复冻融,建议分装后使用。

注意事项

1)需自备PMSF

2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3 WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

() 细胞样品

1. 融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

2. 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5×105-1×106个细胞/管,然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

3. 充分裂解后,10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl200μl

(二)组织样品:

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM

3. 按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5. 充分裂解后,10000-14000 g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

 

 

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