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Hieff Canace® II 耐U高保真DNA聚合酶10144ES60
Hieff Canace® II 耐U高保真DNA聚合酶10144ES60
  • Hieff Canace® II 耐U高保真DNA聚合酶10144ES60

Hieff Canace® II 耐U高保真DNA聚合酶10144ES60

产品报价:393元

更新时间:2024/3/25 11:30:24

地:上海

牌:翌圣生物

号:10144ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司

产品关键词: 高保真文库扩增   耐U高保真DNA聚合酶   外切酶  

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翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)

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Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase

Hieff Canace? II U高保真DNA聚合酶

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

价格(元)

Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA   polymerase

10144ES60

100 U

393.00

10144ES76

500 U

1993.00

产品描述

Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶,和Pfu DNA Polymerase相比,Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升,针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性是Taq DNA Polymerase52倍,是Pfu DNA Polymerase6倍,且完全克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTPDNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

编号

组分

规格

10144ES60100   U

10144ES76500   U

10144-A

Hieff Canace?   II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase1 U/μL

100 μL

500 μL

10144-B

2×Canace? II Uracil PCR buffer (Mg2+dNTPs)

1 mL×3

1 mL×15

运输和保存方法

冰袋运输。

-20℃保存。有效期一年。

产品应用

使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增

使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增

使用含dUTPdNTP进行高保真文库扩增

质量控制

Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase1 U/μL

SDS-PAGE纯度:纯度>95%

核酸内切酶残留:50 μL反应中加入10 μL酶和1 μg φX174 RF I DNA37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测RF II转化比率<10%

磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰;

扩增性能检测:50 μL反应体系中加入1 μL本品,10 ng人基因组DNA以及0.5μM扩增引物扩增1 kb片段。30个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测,有特异性1 kb扩增产物可见;

2×Canace? II Uracil PCR buffer

16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含25 μL本品和1 μg HindIII-λDNA37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含25 μL本品和1 μL T3 DNA37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;

磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入2×Canace? II Uracil PCR buffer2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前,请务必仔细阅读使用说明。

1. 推荐反应体系

所有操作应于冰上进行,2×Canace? II Uracil PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪,各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底,然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。

1 PCR扩增反应体系

组分

体积

模板或接头连接产物

X μL

2×Canace? II Uracil PCR buffer

25 μL

正向引物 (10-25 μM

1-2.5 μL

反向引物 (10-25 μM

1-2.5 μL

Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase1 U/μL

1 μL

ddH2O

Total to 50 μL

【注】:

1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

2)模板:使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率;

3dNTP:推荐dNTP使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTP中不含dUTP,如特殊情况下需要制备含dUTP的模板,可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM

4)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

5Mg2+终浓度:体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可向我公司咨询,要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+buffer

2.推荐反应程序

2 PCR扩增反应程序

步骤

温度

时间

循环数

预变性

98°C

1 min

1

变性

98°C

10 sec

1~15(根据实验要求)

退火

60°C

30 sec

延伸

72°C

30 sec

终延伸

72°C

5 min

1

Hold

4°C

-

-

【注】:

1)预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;文库为1 mincDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min

2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状;

3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间根据实际需要进行调整;

 

相关产品

产品名称

产品货号

规格

价格(元)

 Hieff Canace?   High-Fidelity DNA polymerase

10135ES60/76/80

100/500/1000 U

626/2356/4256

 Hieff Canace?   II High-Fidelity DNA polymerase

10140ES60/76

100/500 U

653/2453

 

HB181206

 


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传真:021-34615995

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