Hieff Canace® II 耐U高保真DNA聚合酶10144ES60
产品报价:393元
更新时间:2024/3/25 11:30:24
产地:上海
品牌:翌圣生物
型号:10144ES60
厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,
公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
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产地:上海
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(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase
Hieff Canace? II 耐U高保真DNA聚合酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase | 10144ES60 | 100 U | 393.00 |
10144ES76 | 500 U | 1993.00 |
产品描述
Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶,和Pfu DNA Polymerase相比,Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升,针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性是Taq DNA Polymerase的52倍,是Pfu DNA Polymerase的6倍,且完全克服了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多弊病。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
编号 | 组分 | 规格 | |
10144ES60(100 U) | 10144ES76(500 U) | ||
10144-A | Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase(1 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
10144-B | 2×Canace? II Uracil PCR buffer (含Mg2+,dNTPs) | 1 mL×3 | 1 mL×15 |
运输和保存方法
冰袋运输。
-20℃保存。有效期一年。
产品应用
使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增
使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增
使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增
质量控制
Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase(1 U/μL)
SDS-PAGE纯度:纯度>95%;
核酸内切酶残留:50 μL反应中加入10 μL酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测RF II转化比率<10%;
磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰;
扩增性能检测:50 μL反应体系中加入1 μL本品,10 ng人基因组DNA以及0.5μM扩增引物扩增1 kb片段。30个循环后经琼脂糖凝胶电泳检测,有特异性1 kb扩增产物可见;
2×Canace? II Uracil PCR buffer
16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含25 μL本品和1 μg HindIII-λDNA,37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含25 μL本品和1 μL T3 DNA,37℃下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;
磷酸酶活性检测:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入2×Canace? II Uracil PCR buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37℃下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前,请务必仔细阅读使用说明。
1. 推荐反应体系
所有操作应于冰上进行,2×Canace? II Uracil PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪,各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底,然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20℃保存。
表1 PCR扩增反应体系
组分 | 体积 |
模板或接头连接产物 | X μL |
2×Canace? II Uracil PCR buffer | 25 μL |
正向引物 (10-25 μM) | 1-2.5 μL |
反向引物 (10-25 μM) | 1-2.5 μL |
Hieff Canace? II Uracil High-Fidelity DNA polymerase(1 U/μL) | 1 μL |
ddH2O | Total to 50 μL |
【注】:
1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。
2)模板:使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率;
3)dNTP:推荐dNTP使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTP中不含dUTP,如特殊情况下需要制备含dUTP的模板,可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。
4)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
5)Mg2+终浓度:体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可向我公司咨询,要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的buffer。
2.推荐反应程序
表2 PCR扩增反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98°C | 1 min | 1 |
变性 | 98°C | 10 sec | 1~15(根据实验要求) |
退火 | 60°C | 30 sec | |
延伸 | 72°C | 30 sec | |
终延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
Hold | 4°C | - | - |
【注】:
1)预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;文库为1 min;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min;
2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状;
3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间根据实际需要进行调整;
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产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff Canace? High-Fidelity DNA polymerase | 10135ES60/76/80 | 100/500/1000 U | 626/2356/4256 |
Hieff Canace? II High-Fidelity DNA polymerase | 10140ES60/76 | 100/500 U | 653/2453 |
HB181206