Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
产品报价:99元
更新时间:2024/3/25 11:30:28
产地:美国
品牌:yeasen
型号:36317ES62
厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,
公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
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(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2)
柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
Antigen Retrieval Buffer (40×Citrate-EDTA, pH 6.2) 柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×) | 36317ES62 | 125ml | 4℃或-20℃ | 99.00
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产品描述
免疫染色实验,细胞或组织往往需要经多聚甲醛、甲醛或其他醛类固定来维持本身的形态结构,然而此步操作通常会封闭抗原决定簇,使得相当多的抗原不能与抗体很好的进行反应,从而引起染色信号衰减,甚至出现假阴性现象。引起抗原决定簇被掩盖的原因在于:1)醛类固定剂导致组织上的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键,从而封闭抗原表位;2)醛类固定剂在固定过程中与蛋白质发生交联(cross-link),形成醛交联蛋白,导致抗原表位被封闭。因此,需要对固定组织进行抗原修复(antigen retrieval,AR)来逆转被掩盖的抗原表位,使其重新暴露出来,恢复抗原表位-抗体的结合能力,从而改善染色效果。
抗原修复的方法非常多,主要有热诱导的抗原修复(Heat Induced Epitope Retrieval,HIER)和酶诱导的抗原修复(Proteolytic Induced Epitope Retrieval),修复方法的选择需要考虑到抗原表达程度、抗体要求、组织类型以及组织固定方法等因素。作为免疫染色至关重要的一步,抗原修复方法的选择、温度、pH值、修复时间、修复介质都会影响到实验结果。实验者需根据自身的实验体系以及实验条件来选择恰当的修复溶液,从而达到最佳的修复效果。
本品为柠檬酸钠-EDTA抗原修复缓冲液,pH 6.2,采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA,结合了两者修复抗原的优点,并经过适当优化,可以更加有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。本品可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
本品为40×浓缩的柠檬酸钠-EDTA抗原修复液,使用前需用ddH2O稀释成1×工作液。
运输和保存方法
室温运输。4℃或-20℃保存。一年有效。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)抗原修复通常用于醛类固定的石蜡切片,而冰冻切片由于组织比较脆弱,易在修复过程中被破坏掉,因此比较少进行抗原修复。然而醛类固定的冰冻切片同样会发生蛋白交联而封闭抗原表位,导致染色效果不佳。很多文献资料表明采用适当的方法进行冰冻切片抗原修复,也能显著改善染色效果。特别是当染色效果欠佳的前提下,可考虑进行冰冻切片的抗原修复。
3)本产品经冻存后需经适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂,加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状,属于正常现象,并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后,例如1-2天,溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品,此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状,也属于正常现象,请放心使用。
4)修复过程中一定要使用足量的修复液(1×)来完全浸没组织切片。
使用方法
1. 对于石蜡切片
1)脱蜡:a)二甲苯中脱蜡3次,5min/次,期间更换新鲜二甲苯;b)无水乙醇脱水2次,5min/次;90%乙醇脱水2次,5min/次;70%乙醇脱水1次,5min/次;蒸馏水冲洗2次,5min/次;
2)抗原修复:用高压蒸汽或者水浴锅预热装有柠檬酸钠修复液(1×)的容器,使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中(一定要完全浸没),然后根据现有的实验条件选择合适的方法(高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复)来进行95-100℃持续加热,时间约20min(加热时间可控制在10-30min,最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。
【注】:总的来说,高压热修复具有温度均一,节省时间,效果稳定等特点,其修复强度最大,是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用,修复强度稍低于高压修复,但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中,需要避免暴沸和过多的水分蒸发。
3)冷却:取出容器,室温冷却约20~30min。
4)清洗:用免疫染色洗涤液(如1×PBST)清洗切片1-2次,3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。
2. 对于冰冻切片
1)清洗:用PBST(1×) 或者其他免疫染色用的清洗液如TBS,TBST等清洗切片1~2次,各3~5min。
2)抗原修复:用高压蒸汽或者水浴锅预热装有柠檬酸钠修复液(1×)的容器,使得溶液温度达到95~100℃。将切片浸于其中(一定要完全浸没),然后根据现有的实验条件选择合适的方法(高压热修复、微波热修复或沸水浴热修复)来进行95-100℃持续加热,时间约20min(加热时间可控制在10-30min,最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。
【注】:总的来说,高压热修复具有温度均一,节省时间,效果稳定等特点,其修复强度最大,是最常用的热修复法。微波修复法也比较常用,修复强度稍低于高压修复,但优于沸水浴修复强度。微波加热修复的过程中,需要避免暴沸和过多的水分蒸发。
3)冷却:取出容器,室温冷却约20~30min。
4)清洗:用免疫染色洗涤液(如1×PBST)清洗切片1-2次,3-5min/次。之后进行封闭等后续的免疫染色步骤。
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