美国Chroma公司 滤光片 DAPI, TRITC, ECPF, CY3, DSred, FITC染料滤光片 FISH滤光片 TIRF滤光片 Raman

美国Chroma公司是世界顶级的滤光片生产商，提供最高品质的荧光滤光片、激光滤光片产品。Chroma的滤光片被国际四大显微镜厂家，奥林巴斯 莱卡 尼康 蔡司选用作为首要供货商，除了提供直接匹配Olympus Leica Nikon Zeiss显微镜的滤光片产品，Chroma还提供各种定制产品，比如流式细胞仪、多色FISH滤光片、荧光定量PCR、DNA测序仪、芯片扫描仪。Chroma的滤光片产品广泛应用于生物制药、医学研究、激光仪器、机器视觉和天文学等领域。Chroma公司所有滤光片都提供终生质保服务。维尔克斯光电代理Chroma,Chroma滤光片,Chroma公司,美国Chroma荧光滤光片。提供美国Chroma公司 滤光片 DAPI, TRITC, ECPF, CY3, DSred, FITC染料滤光片 FISH滤光片 TIRF滤光片 Raman滤光片。

荧光是一种光致发光现象，即物质吸收入射光后进入激发态，并立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光。荧光现象目前广泛应用于生物医学中的细胞内物质的变化、吸收、运输和定位等研究。通常的观测方法使荧光显微镜再加上合适的荧光滤光片组。

荧光滤光片的定义

荧光滤光片的作用是在生物医学荧光检验中分离和选择物质的激发光与发射荧光的特征波段光谱。荧光滤光片一般由三个透镜组成：激发滤光片（EX）、二向色镜和发射滤光片(EM)，他们都至于滤光片盒中（Cube），具体结构如下图所示，

激光滤光片的作用是使激发光能够有效的通过，而避免外界荧光波段的光线进入滤光片盒，二向色镜的作用主要是分光，反射激光使其照射样品，同时又能够让样品产生的荧光通过，达到发射滤光片，发射滤光片的作用是进一步滤掉激发光和其它杂散光，使系统得到比较纯粹的荧光信号。

滤光片的选择

荧光滤波片选取的原则是在成像端尽可能让荧光/发射光透过，同时完全阻挡激发光，获得最高的信噪比。尤其是对于多光子激发和全内反射显微镜的应用，微弱的噪声也会对成像效果造成很大的干扰，因此对信噪比的要求更高。

通常我们看滤光片的参数一般会看透射率光谱，但往往荧光相对于激发光的强度很弱，选择滤光片更需要参考阻挡深度光谱图——OD值。OD值更能直观地反映滤光片对光的阻挡特性。

在选择激发滤光片和发射滤光片时，两者的阻挡深度光谱交点（OD交点）是重要的判断标准，一般要求宽场光源激发是交点OD值大于5，激光激发时大于OD6，以实现较好的荧光信噪比。

有时激发和发射滤光片（EX和EM滤光片）的透射光谱组合看起来很完美，但转换成OD值之后却发现光谱交点仅为OD1，不符合荧光成像的基本要求。因此，一般会建议激发和发射滤光片的透射光谱有一定的距离，比如10nm。

好的滤光片采用磁控溅射技术镀膜而成，磁控溅射工艺使滤光片具有更陡峭的边缘，也具有更附着力。

高端、终端和低端滤光片

高端滤光片由于具有更好的光谱曲线，其在相同的条件下成像效果更为明显，更利于观察各种生物医学现象。Chroma公司的39000 AT系列中终端产品，而49000 ET系列为高端产品，成像效果有明显的差别。高端ET零漂移滤光片，即保证透射波前扭矩TWD<±1像素，但中端滤光片该项指标要低很多。

TIRF全内反射滤光片也属于高端滤光片产品，其要求反射波前扭矩非常好。

另一类高端产品Raman 拉曼滤光片则要求激发滤光片有极窄的透过谱，同时要求光谱边缘比一般滤光片更加陡峭。

Chroma产品分类

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非激光专用

? 中端系列 (前缀：激发/二向色镜/发射都是AT)：

?   AT磁控溅射长通(19000系列)

?   AT磁控溅射带通(39000系列)

?   AT磁控溅射Qdot(39100系列)

? 高端零偏移系列 (前缀：激发/发射-ET, 二向色镜-T):

?   ET零偏移磁控溅射单波段(49000系列)

?   ET零偏移磁控溅射多波段(59000-89000系列)

?   ET零漂移磁控溅射FISH专用单波段(49300系列)

?   ET零漂移磁控溅射FISH专用多波段

? UV滤光片 (激发/发射-ET)

激光专用

? 普通激光应用(前缀：激发-ZET, 二向色镜-ZT, 发射-ET)：

?   ET零偏移磁控溅射单波段(49900系列)

?   ET零偏移磁控溅射双波段(59900系列)

?   ET零偏移磁控溅射三波段(69900系列)

?   ET零偏移磁控溅射四波段(89900系列)

? TIRF应用(前缀：激发-ZET, 二向色镜-ZT, 发射-ET) ：

?   ET零偏移磁控溅射单波段(TRF49900系列)

?   ET零偏移磁控溅射多波段(TRF59900-89900系列)

? Raman应用(前缀：激发-RET, 二向色镜-RT, 发射-RET，陷波滤光片 Notch filter)

其他：

? 21000系列：分光镜，全反镜，偏振镜，热镜/冷镜，中性滤光片等。

? 91000系列：各种型号显微镜的cube, slider, ring等

另外还可定制双光子，超分辨成像，CARS/SRS，qPCR

不同光源下荧光滤波片的选择

汞灯光源的激发滤光片要注意匹配汞灯的发射峰，有时仅仅考虑荧光吸收峰值反而效果不好。

氙灯光源由于具有非常宽的光谱，滤光片需过滤器红外波段的光线，避免漏光。

选择LED光源时需注意其是白光LED还是单色光LED，它们的光谱会有很大差别。

激光光源往往具有不同波长的发射峰，还是需要搭配激发荧光滤光片。

Chroma滤光片的命名规则

激发滤光片(ET480/40x)—ET表示滤光片的系列，480为中心波长，40为带宽(-/+20)，x表示激发片。

二向色镜(T495lpxr)—T表示二向色镜的系列，495表示50% cut-on对应的波长。

发射滤光片(ET535/50m)—ET表示滤光片的系列，535为中心波长，50为带宽(-/+25)，m表示发射片。

T—磁控溅射镀膜二向色镜，非激光应用，通常45度角入射。

ET—磁控溅射镀膜激发片或发射片，通常0度角入射。

ZT—磁控溅射镀膜二向色镜，激光应用，通常45度角入射。

ZET—磁控溅射镀膜激发片，激光应用，通常0度角入射。

lp/sp/bp—长通/短通/带通。

NF—陷波滤光片notch filter缩写。

DC—dichroic缩写。

pc—polychroic缩写，表示多波段的二向色镜。

xr/xt—extended reflection/extended transmission缩写。

xru—extended reflection including UV缩写。

TRF—表示TIRF。

RET—拉曼专用激发片或发射片。

RT—拉曼专用二向色镜。

定制荧光滤光片的注意事项：

首先，需要考虑入射角AOI和圆锥角Cone Angle这两个量，入射角是光线入射的角度，比如二向色镜一般为45°，圆锥角是由于聚焦或发散，边缘光线和中心光线的夹角，有时也用半锥角来表示。

入射角和圆锥角的改变对滤光片的光谱曲线有非常大的影响，入射角增大可能会使滤光片曲线蓝移，而圆锥角可能会使二向色镜的透过区减小。

其次，需要考虑光的偏振，根据菲涅尔偏振公式，光在两种物质界面传播时，反射率和透射率和光的偏振状态有关，因此用户在定制时必须制定光的偏振，以保证最后滤光片达到要求。

荧光滤光片光源

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LM-75金卤灯——仿汞灯光谱。

使用寿命达到1500小时；

具有标准的汞灯光谱峰值；

提供340~800nm波段的光谱；

输出稳定；

操作简单、性价比高；

能够和目前市场主流的显微镜接口直接匹配，无需校正。