5-溴脱氧尿嘧啶核苷 40204ES60
产品报价:186元
更新时间:2024/3/25 11:30:37
产地:美国
品牌:Yeasen
型号:40204ES60
厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,
公司名称: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
翌圣生物科技(上海)股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
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(联系我时,请说明是在来宝网上看到的,谢谢!)5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU)
5-溴脱氧尿嘧啶核苷
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 | 40204ES60 | 100mg | -20℃ | 186 |
5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 | 40204ES80 | 1g | -20℃ | 536 |
5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 | 40204ES90 | 5g | -20℃ | 2136 |
产品描述
目前常用的细胞增殖标记物有4种,DNA聚合酶α(DNA polymerase α),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),Ki-67和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在,应用相对较广。Brdu,也称为溴化去氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。
产品性质
中文别名(Chinese Synonym) | 5-溴-1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧啶;5-溴脱氧尿苷;溴化去氧尿苷; |
英文别名(English Synonym) | Br-dU; BUdR; 5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine; |
CAS号(CAS NO.) | 59-14-3 |
分子式(Formula) | C9H11BrN2O5 |
分子量(Molecular Weight) | 307.10 |
外观(Appearance) | 白色或类白色粉末 |
熔点(Melting Point) | 187-189℃ |
纯度(Purity, HPLC) | ≥99% |
溶解性(Solubility) | 溶于1M 氢氧化铵(50mg/ml),水(高达10mg/ml);溶于DMF,DMSO,水(加热)(50-100mg/ml) |
结构式(Structure) |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃干燥保存,2年有效。
操作步骤
1. Brdu储存液的准备
用1X DPBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液,过滤除菌后,按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存,避免反复冻融。Brdu储存液再融化后,4°C可稳定存放一周。
2. 体内Brdu标记
1) 腹腔注射法(常用):无菌的10 mg/ml(溶于DPBS)适合用于体内注射用。按照100-200 μl(1-2 mg)Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意:最短在注射后0.5 h后在小肠,胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。
2) 根据自身的实验体系,在合适的时间点处死动物,摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。
3. 体外Brdu标记(培养原代细胞或者细胞系)
注:总的来说,10 μMBrdu(稀释于培养液)是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然,建议针对具体的实验体系优化方法。
1) 在96孔板上按标准步骤进行细胞培养,培养时间一般为1-72 h;
2) Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mMBrdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。
3) 按100 μl/孔Brdu工作液的量进行细胞标记,37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意:最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如,对于快速增殖细胞(如HL-60)有效孵育时间为30-45min;对于原代细胞(如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞)孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2x106cells/ml。
4) 制备单细胞层玻片,使用以下任何一种方法:
a. 细胞离心涂片(cytospin)制备:使用细胞离心涂片机,将100μl标记好的细胞(浓度为:1-2 x106cells/ml)直接离心到干净,无脂肪,poly-L-lysin包被的玻片上,风干。
b. 细胞涂片(cell-smear)制备:取一小滴标记好的细胞悬液于干净,无脂肪,poly-L-lysin包被玻片的一端,然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。
5) 将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。
6) PBS清洗细胞3次,每次5min。
7) 加入1.5M HCl中室温孵育30 min。注意:DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。
8) 吸去HCl,PBS清洗2次,每次5min。
9) 进入后续ICC染色步骤。
4. 体外Brdu标记(组织薄片)
1) Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mMBrdu工作液。然后取10 -20 μl 1mMBrdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液(37°C温热)完全浸泡组织。
2) 用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚,2 mm2大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片,利于维持组织的活力。
3) 转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°,CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变,取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的(常用的为2-4 h)。直接丢弃未用完的标记液。
4) 37°C PBS清洗组织薄片,每次5 min。
5) 使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。
注意事项
1) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2) 该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。