产品报价：2102元
更新时间：2024/4/15 9:30:59
产地：美国
品牌：cytoskeleton
型号：PHDG1-A
厂商性质： 生产型,贸易型,服务型,
公司名称： 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 : (13916792673) (400-6111-883)
（联系我时，请说明是在来宝网上看到的，谢谢！）Acti-stainTM 488 Fluorescent Phalloidin
绿色荧光标记鬼笔环肽
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 储存 |
Acti-stainTM 488 Fluorescent phalloidin | PHDG1-A | 500μl | 2739元 | 粉末4℃干燥保存 |
背景描述
鬼笔环肽是一种从鬼笔鹅膏中得到的有毒的环状七肽，可以与纤维肌动蛋白丝非常特异的结合，并且具有很高的亲和力。它能使肌动蛋白聚合物的临界浓度降低到小于1μg/mL，因此，常作为一种聚合促进剂使用。该物质可以被绿色荧光染料标记，从而作为标记物用于组织细胞培养、组织切片或无细胞系中的肌动蛋白标记。被Acti-stainTM 488 phalloidin标记的肌动蛋白丝其生物学特性未发生改变，包括与肌球蛋白结合的能力。
Acti-stainTM488 phalloidin呈橙色，固体，分子量1406。该化合物吸光度和荧光扫描显示分别在500nm和550nm有一吸收峰和荧光峰。其1 x 工作液即可对300-350张盖玻片的细胞进行染色。
注意：鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人，其半数致死剂量为2mg/Kg）。
图1 Acti-stainTM 488 Fluorescentphalloidin的吸光度和荧光扫描图
说明：甲醇稀释标记的鬼笔环肽，对其吸光度和激发光谱分别在250-750nm和500-750nm处扫描，吸收峰为500nm，荧光峰为550nm。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。使用前简短离心使样品至管底，加入500μl无水甲醇配制成14μM的溶液。该溶液可在-20℃稳定保存6个月，冻干产物可以在4℃干燥环境（湿度<10%）下保存6个月。
产品应用
应用1：免疫荧光
目前有多种方法可用于组织培养细胞中的微丝染色，而染色过程中固定是获得良好效果的关键步骤，根据不同的要求有不同的固定方法。用多聚甲醛或者戊二醛的方法固定可以取得较好的染色效果。
试剂
1） Acti-stainTM488 phalloidin；
2） 半丰度的3T3细胞；
3） F-肌动蛋白染色试剂盒（或按4-7配制溶液）；
4） 磷酸盐缓冲液（20mM,PH7.4,150mM NaCl）；
5） 固定液（3.7% 多聚甲醛溶于PBS，pH调制7.0）；
6） 透化液；
7） 抗荧光淬灭封片液（FlukaBiohemika, Cat.#10981）;
8） 100nMDAPI（溶于PBS）;
9） 载玻片；
10） 盖玻片封口液。
图2 经Acti-stainTM488 Fluorescent Phalloidin染色的Swiss 3T3细胞中应力纤维图
备注：按照方法中的步骤利用Acti-stain? 488 phalloidin对生长于玻璃盖玻片上的半丰度的3T3细胞进行染色，利用带有480Ex/535Em设备的荧光显微镜进行观察（CCD摄像机，40倍目镜），明显可见被染成绿色的纤维蛋白丝。
设备
1）荧光显微镜。
2）数字CCD照相机。
方法
1） 于盖玻片上培养组织细胞至半丰度；
2） 100nMActi-stainTM488 phalloidin工作液的准备，即吸取3.5μl 14μM 的Acti-stainTM488 phalloidin的标记储存液于500μl PBS，室温避光保存；
3） 移除培养基，于37℃利用PBS轻轻洗涤培养细胞一次；
4） 利用固定液室温固定细胞10min；
5） PBS室温洗涤细胞30s；
6） 室温透化细胞5min；
7） PBS室温洗涤细胞30s；
8） 将盖玻片移至一张封口膜上，于潮湿的环境下加入200μl 100nM Acti-stainTM 488 phalloidin，室温避光孵育30min。
9） PBS洗涤盖玻片3次；
10） 200μl 100nM DAPI复染DNA30s；
11） PBS冲洗盖玻片，翻转将其放置于滴有荧光猝灭液的载玻片上，用纸巾吸除多余液体；
12） 4 ℃避光保存上述载玻片；
13） 典型的F-肌动蛋白染色结果如图2.
应用2：稳定荧光微丝的制备
在肌球蛋白马达蛋白的研究中，稳定的微丝对于肌动蛋白的能动性分析是一个很好的底物。Acti-stain? 488 phalloidin的结合不会影响肌球蛋白ATP酶对肌动蛋白的激活作用。
试剂
1） 肌动蛋白（250μg）；
2） 常用肌动蛋白缓冲液(5mMTris-HCl pH8.0, 0.2mM CaCl2)；
3） 10x聚合缓冲液(500mM KCl,20mM MgCl2,10mM ATP)；
4） Acti-stain?488 Phalloidin。
设备
荧光显微镜；数字化CCD照相机。
方法
1） 配制含有0.2mM ATP 和1.0mM DTT的肌动蛋白缓冲液，取250μl重悬兔肌肉肌动蛋白。混匀，冰浴1h；
2） 加入1/10体积的聚合缓冲液室温聚合肌动蛋白1h；
3） 取2.5μl 14μM Acti-stain? 488 Phalloidin于500μl聚合缓冲液中，混匀，利用该溶液100倍稀释上述聚合的微丝；
4） 滴1滴抗荧光猝封液于载玻片上，吸取1μl标记的肌动蛋白于上述抗荧光猝灭封片液中；
5） 盖上盖玻片，吸除多余液体；
6）显微镜观察，微丝呈2-10μm的长度，4℃避光可以稳定保存一周。
产用使用
1）用于固定的组织切片、组织培养细胞中微丝的荧光染色。不像一些肌动蛋白抗体，Acti-stain? 488 Phalloidin仅与F肌动蛋白丝结合，从而降低了荧光背景。另外，该染料的结合没有物种差异。
2）体外稳定的荧光微丝的制备。
参考文献
1）Fluorescen dye is sold under license from Anaspec.
2）Wμlf, E. et al. (1979). ProcNatlAcadSci USA.76(9):4498-4502.
3）Kron, S.J. et al. (1991). Meth.Enzmol. 196: 399-416.
产品订购
产地 | 货号 | 名称 | 规格 | 货号 | 单价 |
cytoskeleton | PHDR1 | Rhodamine Phalloidin 罗丹明标记现货 | 500ul | PHDR1 | 2102元 |
cytoskeleton | PHDG1-A | Acti-stain? 488 phalloidin 绿色荧光标记现货 | 500u | PHDG1-A | 2102元 |
cytoskeleton | PHDH1-A | Acti-stain? 555 phalloidin 红色荧光标记现货 | 500u | PHDH1-A | 2102元 |
cytoskeleton | PHDN1-A | Acti-stain? 670 phalloidin蓝色荧光标记现货 | 500u | PHDN1-A | 2102元 |
