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商品编号:54184
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高效转染各种真核细胞6.0ml

价    格:10500.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:GT1211-04

状    态:正常点击量:1479

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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可用于450次6-孔板或3.5mm培养皿的细胞转染。

产品说明

GeneTran是一种新型的脂质体和多聚物混合的转染试剂,可用于各种真核细胞系的质粒转染,如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干细胞和纤维原细胞、间质干细胞、NCCIT、果蝇细胞。同时原代细胞也能转染,如人肿瘤细胞、大鼠肾上腺嗜铬细胞、大鼠和小鼠皮质神经细胞、肝细胞等。对于悬浮细胞也有较高的转染效率和较低的毒性,如HEK 293、小鼠淋巴细胞、昆虫细胞(sf9, sf21, High-Five)。有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。
 
主要特点
 
n  高效转染各种贴壁细胞。
n  对胚胎干细胞和原代细胞有较高的转染效率。
n  对悬浮细胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆虫细胞也有很高的转染效率。
n  在同类产品中具有更高的转染效率和更低的毒性。
n  有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。
n  可用于单个质粒或多个质粒共转。
n  转染24-72小时后,有高的蛋白表达量。
n  性价比高
n  操作简便
 
保存条件
 
GeneTran 可在4℃(切勿放-20℃)至少保存12个月。使用之前请先将试剂瞬时离心。
 
质粒转染步骤
 
以下步骤是用于35mm培养皿或6孔培养板转染真核细胞的。若用于其他规格培养皿的转染,请参考表1的用量。所有的数据和体积都是每孔的用量。对于绝大多数的细胞系和原代细胞,质粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。转染HEK293细胞可只按1:1混合。有时优化条件也是必须的(参见质粒DNA转染条件的优化,第5页)。

A. 转染贴壁细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)
转染前一天铺板使转染时细胞达到60-70%的汇合度。
1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:
2.5     μg    质粒DNA
5        μL    GeneTran
x        μL    无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
            总体积100 μL
* 绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40min。
3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可 检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。
 
B. 转染悬浮细胞(35 mm培养皿或6孔培养板)
转染时保证细胞超过90%的密度
1. 对于每一个转染样本,按如下比例配制转染混合液:
2.5     μg    质粒DNA
5        μL    GeneTran
X        μL    无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
            总体积100 μL
*  绝对不能在转染混合液中混有Opti-MEM和血清
2. 用枪头吹打混匀,放置于室温20-40分钟。
3. 将混合液加入细胞培养皿中,晃动培养皿混匀培养液。放入CO2培养箱。
    注:血清浓度对于转染效果无影响,经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间,对细胞进行换液。转染18-48小时之后可检测基因表达。如果有蛋白表达,请在转染后4-5天收集培养液。
5. 如果要得到稳定细胞株,请在转染24小时后按1:10传代培养。

表1各种细胞培养板转染推荐用量
 
培养皿/板
表面积(cm2
培养液(mL)
混合液(μL)
质粒(μg)
GeneTran
10cm
56
10
500
10
20-30 µL
60mm
21
3
150
3
6-9 µL
35mm
8
2
100
2.5
5-7.5 µL
6孔
9.5
2
100
2.5
5-7.5 µL
12孔
3.8
1
50
1
2-3 µL
24孔
1.9
0.5
25
0.5
1-1.5 µL
48孔
0.95
0.25
12.5
0.25
0.5-0.75 µL
96孔
0.32
0.1
5
0.1
0.2-0.3 µL

质粒转染条件优化
 
n  前面介绍的转染步骤是针对一般比较好转的细胞。
n  对于C2C12肌肉细胞系,FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的转染效率不到10%,而GeneTran按照下面的体系转染效率可达70%:
6          μg    质粒DNA
12-18  μL     GeneTran
X          μL    无血清DMEM(或其他无血清培养基, PBS, DPBS等)
            总体积100 μL
 
n  对于其他细胞系,可参考以下方法优化条件:
A. 在35mm培养板中将质粒量增加到3μg,4μg和6μg。
B. 在35mm培养板中将GeneTran增加到15μL。
C. 如果转染效率较高,但死细胞较多,可降低质粒量到1μg或更低。也可以减少孵育时间到5-24小时。
D. 可按下表优化条件:
问题
DNA
GeneTran
细胞毒性
降到1-2 μg
降到2-3 μL
转染效率低
对于难转的细胞增加到4μg
增加到>1:4
对于特别难转的细胞增加到6μg
增加到>1:4

 





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