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商品编号:67229
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EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-01

价    格:询价

产    地:安徽更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:中科院型    号:HH-01

状    态:正常点击量:777

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安徽青志生物科技有限公司

联 系 人:何先生

电     话:0551-63702898

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EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-01运输保存:
       采用干冰保存运输。收到细胞时,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按指定条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。
保存条件:4℃保存一年;-20℃长期保存
用途:只可用于科研。
储存:液氮。
运输:干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-01冻存条件操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。

产品参数

细胞名称EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-01
形态特性淋巴母细胞样
生长特性悬浮生长
特征特性该细胞系来源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法1:2传代;5-6天一次
传代情况P3
冻存条件基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测荧光法(-)
STR-
同工酶
染色体
使用权限A类
公司简介安徽青志生物科技有限公司作为专业的生物科技公司,专业经营代理国内外优质品牌,拥有华中、华东地区最大的国内细胞库资源国内细胞库,经营种类包括人类正常组织来源细胞、肿瘤细胞、转化细胞、干细胞。动物类包括小鼠源细胞、大鼠源细胞、仓鼠源细胞、豚鼠源细胞、猫源细胞、犬源细胞、兔源细胞、猪源细胞、羊源细胞、貂源细胞、牛源细胞、猴源细胞、鱼源细胞等、各类昆虫细胞、培养基、抗体、生物试剂、耗材等,青志生物始终致力于为客户提供可靠的研究材料以及方便快捷的服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关专业人士进行维护,确保您在安徽青志生物公司获得最优质服务!
备注本库的细胞系(株)仅用于研究工作,未经许可不得用于其它目的。使用者不得将本库细胞系(株)转让给第三者。使用者在发表研究论文或结果时,应注明细胞系(株)的来源。
保藏单位安徽青志生物科技有限公司



产品介绍

EB病毒转化的人B淋巴细胞;HH-01操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。



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