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商品编号:72128
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BI MSCgo™间充质干细胞成软骨诱导分化试剂05-220/05-221

价    格:询价

产    地:其他国家更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:BI型    号:05-220/05-221

状    态:正常点击量:369

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山东博科干细胞应用研究院有限公司

联 系 人:母经理

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等     级: (第 5年)

性     质:生产型,贸易型,

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产品描述

MSCgo?成人骨髓间质干细胞成软骨诱导分化培养基试剂盒,不含血清,无异源,适用于不同来源的MSC,如骨髓、软骨组织和脐带组织;hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT

 

成软骨结果

3D培养hMSC分化成软骨细胞,典型的细胞外基质富集蛋白多糖,形成软骨。蛋白多糖可以作为软骨形成的一个指标,并且可以Alcian Blue(深蓝色的含铜染料)染色检测。Alcian Blue染色是成熟软骨细胞的标志。不同的hMSC(细胞类型、年龄、代数)染色强度不一致。

 

试剂盒组成

MSCgo?间质干细胞成软骨诱导分化培养基试剂盒

产品描述

储存

货号

规格

MSCgo?   Chondrogenic Differentiation Basal Medium

2-8°C

05-220-1B

100ml

MSCgo? Chondrogenic   Differentiation Supplement Mix

-20°C

05-221-1D

10ml

 

完全培养基配制

1       室温下解冻Supplement Mix。

2       将Supplement Mix 用1:10倍的Chondrogenic Basal Medium稀释(如:10ml Supplement Mix+90ml Basal Medium

3       完全培养基可在2-8°C储存一个月。

所需材料

MSCgo? Chondrogenic Differentiation: BI; 05-220-1 and 05-221-1.

? 96-well U-bottom, 非组织培养处理的板(悬浮培养)。(BD FALCON; 35-1177, 或 CELLSTAR; 650185 Greiner)

? MSC NutriStem? XF : BI; 05-200-1 and 05-201-1.

可选- Alcian Blue 8 GX (Sigma; A-3157)。建议选择Vivacell品牌,间充质干细胞成软骨分化染色试剂盒,货号: C37B00150

 

 

成软骨诱导分化操作

1.     接种hMSC,3D培养在 96-well U-bottom 培养板中每孔加入100μl MSC NutriStem? XF,接种1x105细胞 (30-40x104 cells/cm2)。无需预包被。

注意:微量培养技术也是一个选择并且可以激发球形细胞的形成:接种10μl 1x107cells/ml 入板的中心(最终1x105cells/well),使其贴壁2小时,然后加入培养基0.1ml/well。

2.     置于37°C,5% CO2培养箱中培养。在24-48小时内会自发形成球状体。

3.     分化:培养24小时后,将MSC NutriStem? XF培养基吸除,每孔加入0.2ml分化培养基。

4.     置于37°C,5% CO2培养箱中培养14-21天。

注意:培养时间长,将得到更成熟的软骨细胞(Alcian Blue染色强度更大)。

5.     每3-4天更换分化培养基(0.2ml/well)。

注意:小心不要吸入球状体。

6.     评估软骨形成:使用Alcian Blue染色。蛋白多糖-软骨形成的标志,被染成深蓝色。

 

Alcian Blue染色操作(可选)

制备1% Alcian Blue 溶液

l  将0.2g Alcian Blue 8 GX (Sigma;A-3157)溶解于20ml 99%异丙醇0.1N HCl中。

l  用0.45 μm注射器(如:Minisart 16555)过滤。

l  溶液置于2-8°C储存一年。

 

Alcian Blue染色过程

注意小心操作不要吸入球状体。

l  吸除培养基,用DPBS洗一次(BI;02-023-1,0.2ml/well)

l  固定:吸除DPBS,每孔加入0.2ml 10% 福尔马林(4% 甲醛)。室温固定30-60分钟。

l  吸除福尔马林,每孔用0.2ml 蒸馏水洗涤2次。

l  吸除蒸馏水,每孔加入0.2ml 1%Alcian Blue染色工作液。室温过液,注意避光。

l  吸除染液,每孔用0.2ml 0.1N HCl洗涤2-3次。

l  吸除HCl,每孔加入0.2ml 蒸馏水。

l  观察成软骨染色效果,图像采集,及软骨形成评估。

注意:软骨含有蛋白多糖保持蓝色,而球状体不含蛋白多糖在洗涤步骤中失去染色。


半定量Alcian Blue染色(可选)

l  每孔用0.15ml 8M Guanidine HCH溶液(GuHCl,Sigma;G9284)洗脱染料。

l  2-8°C过夜。

l  600nm 测OD值(8M Guanidine HCH溶液作为空白对照)。






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