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商品编号:73647
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abs9232 BCA蛋白定量试剂盒

价    格:416

产    地:上海更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:absin型    号:abs9232

状    态:正常点击量:191

17621920087
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爱必信(上海)生物科技有限公司

联 系 人:爱必信

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等     级: (第 9年)

性     质:生产型,服务型,

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描述

BCA法是理想的蛋白质定量方法,在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,颜色的深浅与蛋白质的含量成正比,可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质去垢剂等影响小。

产品特点
1、准确灵敏,线性范围广,BCA试剂的蛋白质测定范围是20~2000ug/mL;
2、快速:45min内完成测定,比经典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3、不受样品中离子型和非离子型去污剂影响;
4、检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝,可以酶标板法或分光光度计法测定蛋白质浓度。
 
组分:
 品名500次2500次
BCA蛋白定量A液100mL125mL×4
BCA蛋白定量B液4mL10mL×2
5mg/mL BSA1mL1mL×5
使用方法
实验流程:
1、BSA 标准品的稀释
(1)取 10uL 5mg/mL BSA 标准品稀释至 100uL,使其终浓度为 0.5mg/mL。蛋白样品在什么溶液中溶解,BSA 应用相应的溶液稀释。通常情况下,为了方便,可用蒸馏水稀释。
(2)在 96 孔板中分别加入 0,1,2,4,8,16,20uL 稀释后的标准品(0.5mg/mL BSA),加蒸馏水将溶液补至 20uL,得到的各点的浓度分别为:0,0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.5mg/mL BSA,建议每种浓度做 2~3 个复孔。
2、BCA 工作液的准备
(1)按下列公式计算所需要的 BCA 工作液体积;(标准曲线+未知样品个数)×(重复次数)×(每个样品所需的 BCA 工作液体积)=所需要BCA 工作液的总体积
例如:需要测定标准曲线和 3 个样品的蛋白浓度,每个实验重复 2 次,每次实验需要 200uL工作液:(5 个标准曲线点+ 3 个样品) × (2 次重复) × (0.2mL) = 3.2mL 工作液
(2)将 50 份 A 液与 1 份 B 液混合后得到工作液。
注意:当 B 液加入 A 液时,可看见浊度,轻轻晃动后消失,工作液为绿色。
3、样品检测
(1)在 96 孔板中加入适当体积的样品,用蒸馏水将样品体积补至 20uL。
4、在各孔(标准曲线孔和样品孔)中分别加入 200uL BCA 工作液,37 度孵育 30min;
注:也可在室温下放置 2h,或 60 度孵育 30min。BCA 法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。
5、在 562nm 处测其吸光度值,绘制标准曲线。
(1)用酶标仪检测各点的吸光度值,并记录;
(2)用各点的吸光度值减去空白对照的吸光度值,并记录;
(3)以 BCA 浓度为 X 轴,吸光度值为 Y 轴,计算回归方程。Y=aX
(4)用样本的吸光度值减去空白对照的吸光度值,并带入回归方程,计算出样本浓度。如果样本已进行稀释,请乘以稀释倍数。
性能
保存方法BCA蛋白定量试剂盒A、B应保存于2~8℃;5mg/mL BSA应保存于-20℃。
注意事项1、将A、B液恢复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。若A液出现物质析出,请室温平衡后,轻轻晃动,使其溶解后再使用。
2、蛋白标准请混匀后,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
3、需酶标仪一台,最佳检测波长为562nm。并需96孔板。






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