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商品编号:73631
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abs9116 Lysis Buffer for WB/IP Assays

价    格:360

产    地:上海更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:absin型    号:abs9116

状    态:正常点击量:108

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爱必信(上海)生物科技有限公司

联 系 人:爱必信

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等     级: (第 9年)

性     质:生产型,服务型,

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产品介绍

描述

 本免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品,适用于 PAGE,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。

别名免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液
使用方法
1、培养的细胞样品
1)充分融解 WB/IP 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。
2)贴壁细胞:吸除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入 100-200μl 裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。裂解 15-30 分钟,通常裂解液接触细胞 1-3 秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。大团细胞比较难裂解充分,少量细胞则由于接触充分,先对比较容易充分裂解。
3)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫共沉淀等实验。
【裂解液用量说明】:通常 6 孔板每孔细胞加入 100μl 裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150μl 或 200μl。


2、组织样品
1)将组织剪切成细小的碎片。
2)充分融解 WB/IP 裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入 PMSF(100mM),使其最终浓度为 1mM。
3)按照每 20mg 组织加入 100-200μl 裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】
4)用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5)充分裂解后,10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫共沉淀等实验。
如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。
性能
保存方法-20℃冻存




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