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无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒(Mega 6)10preps
无内毒素快速质粒超大量提取试剂盒(Mega 6)10preps
价 格:3460.00
产 地:美国更新时间:2021/9/10 14:45:14
品 牌:Biomiga型 号:PD1622-02
状 态:正常点击量:1084
联 系 人:言国英
电 话:021-54461558
传 真:021-54461657
等 级: (第 15年)
性 质:生产型,
联系我时请说在来宝网上看到的,谢谢!
试剂盒组分:
Catalog#
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PD1622-02
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Preps
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10
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DNA Unit
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10
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Filter Unit
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10
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Replacement Cup
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20
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Buffer A1
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2×320 mL
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Buffer B1
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2×320 mL
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Buffer N3
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160 mL
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Buffer KB
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530 mL
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Buffer RET
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3×420 mL
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RNase A(20 mg/mL)
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2×32 mg(2×1.6 mL)
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Endofree Elution Buffer
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270 mL
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User Manual
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1
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保存条件:
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
注意事项:
- 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer.
- 转化菌: 若为-70℃甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
- 切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
- 杯结合能力:6 mg
操作简明步骤:
- 取500 µL新鲜的菌液接种到 800-1,000 mL (勿超过 500 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
- 加入60 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
- 加入 60 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入15 ml Buffer N3, 立即反转几次至出现絮状白色沉淀。涡漩震荡10 秒。充分混匀后,溶液将会变的 颜色均一,如果此时溶液颜色不均一,均局部颜色过深,建议将溶液轻甩几次,以充分混合溶液,
- 将双层Filter unit与500 mL或1000 mL的灭菌瓶(Corning# 430518 or 430282 or equivalent) 连接,旋紧,再将此装置与真空负压装置连接。
- 先将步骤“5”中底部较澄清的裂解产物转移至双层Filter unit中,静置5分钟后打开真空装置,使负压由低到高,5分钟后增至最大(0.04 Mpa)
- 当大部分裂解液已被过滤时,关掉真空负压装置,等候1分种,拆卸装置,移去双层Filter unit。
- 再将DNA unit杯与一个新的灭菌的500 mL或1000 mL的灭菌螺口标准瓶连接,旋紧。并将过滤嘴与真空负压装置连接。在步骤“7”中收集到的裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (如120 mLBuffer RET加入120 mL的上清液中), 60 mL100%乙醇,立即混合均匀,立即将一半倒入DNA unit杯中,开启负压装置,进行过滤吸附操作。
- 再将剩下一半倒入DNA unit杯中,当所有裂解液已过滤完,再维持真空1分钟后,关掉负压装置。
- 向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB,最大负压(0.04Mpa)1分钟,使液体完全通过DNA Unit 杯。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇,最大负压(0.04 Mpa)1分钟,使乙醇完全通过DNA Unit杯。重复此操作步骤一次。
- 在DNA Unit杯中加入60 mL无水乙醇,最大负压1分钟,关掉负压装置,倒掉瓶子中的废液,将DNA Unit杯重新连接至标准瓶上,开启负压装置至最大负压,真空抽20分钟,以充分去除残留的乙醇。
- 关掉负压装置,静置一分钟,移去标准瓶,将DNA Unit 连接至一个新的50 mL的离心管中,并旋紧。
- 加入10 mL Endofree Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室温放置2分钟,打开负压装置至最大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到3~5 mL洗脱液,这是1st 洗脱液。
- 关掉负压装置,将DNA Unit连接至一个新的50mL的离心管中,加入8 mL Endofree Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上,室温静置2分钟,开启负压装置至最大(0.04 Mpa)洗脱DNA。此时会收集到约3-6 mL洗脱液,这是2nd洗脱液。
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