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商品编号:53883
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无内毒素快速质粒大量提取试剂盒(25preps)

价    格:2310.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:PD1520-02

状    态:正常点击量:906

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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产品组成

Catalog #

PD1520-00

PD1520-01

PD1520-02

Preps

2

10

25

ezBindTM Columns

2

10

25

Buffer A1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer B1

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer N3

8 mL

40 mL

85 mL

Buffer KB

22 mL

110 mL

270 mL

Buffer RET

22 mL

110 mL

270 mL

RNase A(20 mg/mL)

2.2 mg

(110 μL)

11 mg

(550 μL)

27 mg

(1.35 mL)

Endofree Elution Buffer

5 mL

25 mL

60 mL

User Manual

1

1

1

注意事项:

1.       质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

2.       转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。

3.       切勿直接取冻存的菌进行培养。

操作简要步骤:

1.   100 µL新鲜的菌液接种150-200 mL (勿超过 200 mL)LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。

2.   加入10 mL Buffer A1确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。

3.   加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 

4.   加入3 mL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现白色絮状沉淀。

5.   将离心管转至高速离心机,在室温下12,000 x g离心10分钟(若上清中有白色沉淀,可再次离心)

6.   转移上清液20 mL(不超过20 mL)至新的50mL离心管中,加入0.5倍体积的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入10 mL Buffer RET) 10 mL100% ethonal,用手用力甩5次以混匀,需马上离心过DNA柱。

7.   立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。将剩余溶液转移至DNA柱中,室温下> 2,500 x g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复直至所有的溶液通过DNA柱。

8.   可选:向离心柱中加入10 mL Buffer KB,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。

9.   向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤9”

10.      将离心柱放回高速离心机中,室温下5,000 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。

11.      将离心柱转至一个新的50 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,> 2,500 x g离心5分钟,以洗脱质粒DNA。50 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟,> 2,500 x g离心5分钟。 两次洗脱将提高得率。





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