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商品编号:53878
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无内毒素快速质粒中量提取试剂盒(25preps)

价    格:1430.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:PD1420-02

状    态:正常点击量:889

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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产品组成
 

Catalog #

PD1420-00

PD1420-01

PD1420-02

Preps

2

10

25

EzBindTM Columns

2

10

25

Buffer A1

6 mL

30 mL

70 mL

Buffer B1

6 mL

30 mL

70 mL

Buffer N3

3 mL

15 mL

30 mL

Buffer KB

12 mL

60 mL

135 mL

Buffer RET

12 mL

60 mL

135 mL

Endofree Elution Buffer

3 mL

15 mL

40 mL

RNase A (20 mg/mL)

0.6 mg

(30 µL)

3 mg

(150 µL)

7 mg

(350 µL)

User Manual

1

1

1

 

保存条件:

RNAse A4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 4℃保存,其它组分室温保存。

注意事项:

1.      质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash BufferEndofree Elution Buffer.

2.      转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。

3.       切勿直接取冻存的菌进行培养

操作简明步骤:

1.       50 µL新鲜的菌液接种15-50 mL (勿超过 50 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟收集菌体,并尽可能的吸去上清

2.       加入2.5 mL Buffer A1确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。

3.       加入2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清 

4.       加入1 mL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现白色絮状沉淀

5.       将裂解液转移至高速离心管,室温下在12,000 x g 离心10分钟。

6.       转移上清液5 mL向裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),3 mL100% ethonal,用手用力甩5次以混匀,需马上离心过DNA柱

7.       立即转移6 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中,室温下5,000 x g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA

8.       可选:向离心柱中加入5 mL Buffer KB,室温下5,000 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中

9.       向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室温下5,000 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9

10.    将离心柱放回高速离心机中,室温下5,000 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇

11.    将离心柱转至一个新的15 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入1 mL Endofree Elution Buffer, 室温放置1分钟,5,000 x g 离心5分钟,以洗脱质粒DNA

12.    15 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟,5,000 x g 离心5分钟。 两次洗脱将提高得率





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