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商品编号:53854
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无内毒素小量质粒提取试剂盒I(50preps)

价    格:406.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:PD1212-01

状    态:正常点击量:964

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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试剂盒组分:
 
Catalog #
PD1212-01
Preps
50
ezBind Columns
50
Buffer A1
25 mL
Buffer B1
25 mL
Buffer N3
30 mL
Buffer KB
30 mL
DNA Wash Buffer*
15 mL
EndoClean Buffer
10 mL
Endofree Eluiton Buffer
10 mL
RNase A(20 mg/mL)
2.5 mg(125µL)
User Manual
1
 
保存条件:
 
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
 
注意事项:
  1. 质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N3,相同体积的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
  2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
  3. 切勿直接取冻存的菌种进行培养。
操作简明步骤:
  1. 接种新鲜的单个菌落到3-12 mL的LB培养基 (含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。
  2. 室温下10,000 x g离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
  3. 加入450 µL Buffer A1 (确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保菌体充分悬浮。
  4. 加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  5. 加入100 µL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现白色絮状沉淀。
  6. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中仍有白色沉淀,可翻转后再次离心5分钟)
  7. 定量吸取离心后的上清液至新的1.5mL管中,加入0.1 volume的EndoClean Buffer,混匀后冰浴10分钟,其间不时摇匀(EndoClean Buffer粘稠难吸,可将枪头剪掉头后再吸取)
  8. 室温下(冰浴取出后务必使溶液温度恢复到23oC以上,否则溶液不分层,为保证分层效果,可直接在65oC温育5分钟)13,000 rpm离心10分钟。此时溶液分为两层,上层水相含有质粒,下层红色有机相含有无内毒素。
  9. 将上层水相转移至一个新的2.0 mL管中,加入450 µL的Buffer N3及400 µL的100% ethonal,用手用力甩3次以混匀。
  10. 将溶液700 µL转移至带有收集管的DNA柱中,室温下13,000 rpm 离心20秒,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复此步骤至全部溶液转移至DNA柱中。
  11. 可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。
  12. 向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer (确保已加入无水乙醇)室温下,13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“12”。
  13. 将离心柱放回高速离心机中,13,000 rpm室温下开盖离心2分钟,以彻底去除残留的乙醇。
  14. 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中,向DNA柱的正中间加入50~100 µL (体积>50 µL) 的Endofree Elution Buffer,洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间,室温放置1分钟,13,000 rpm 离心1分钟,收集洗脱液到同一个离心管中。

操作流程:





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