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商品编号:53839
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离心法质粒大量提取试剂盒(25preps)

价    格:1850.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:PD1511-02

状    态:正常点击量:895

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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试剂盒组分:
 
Catalog#
PD1511-01
Preps
10
ezBindTM Columns
10
Buffer A1
110 mL
Buffer B1
110 mL
Buffer C1
135 mL
Buffer KB
110 mL
RNase A(20 mg/mL)
11 mg(550 µL)
Elution Buffer
30 mL
User Manual
1
 
保存条件:
 
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
 
注意事项:
  1. 质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer。.
  2. 转化菌:若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
  3. 柱结合能力:1 mg
操作简明步骤:
  1. 取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
  2. 加入10 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
  3. 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入12 mL Buffer C1, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现白色絮状沉淀。
  5. 将离心管转至高速离心机,在室温下14,000 x g 离心10分钟(若上清中有白色沉淀,可再次离心,)。
  6. 小心吸取离心后的上清液至15 mL管中(避免吸起沉淀),加入12 mL 100% 乙醇,立即摇匀,需马上离心过DNA柱。
  7. 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
  8. 可选: 向DNA柱中加入 10 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。
  9. 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇,室温下>2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
  10. 将离心柱放回高速离心机中,室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。
  11. 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL灭菌ddH2O(pH在7.0-8.5之间)或Elution Buffer,室温放置1分钟,5,000 x g离心5分钟,以洗脱质粒DNA。若想提高得率,将50 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间,5,000 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
操作流程:




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