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商品编号:53830
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质粒小量提取试剂盒II(250preps)

价    格:1785.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:PD1213-03

状    态:正常点击量:957

15068328216
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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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试剂盒组分:

Catalog#
PD1213-02
Preps
100
ezBind Columns
100
Buffer A1
50 mL
Buffer B1
50 mL
Buffer N1
60 mL
Buffer KB
60 mL
DNA Wash Buffer*
2 x 15 mL
Elution Buffer
30 mL
RNase A (20 mg/mL)
5 mg
(250 µL)
User Manual
1
 
保存条件:
 
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
 
注意事项:
  1. 使用前请将适量乙醇加入DNA Wash Buffer,令乙醇终浓度为80%
  2. 纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer
  3. 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
  4. 若用于提取1-4 mL的菌落,请将Buffer A1, B1, N1的量降低至250 µL, 250 µL 及 350 µL,DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不变。
操作步骤:
  1. 接种新鲜的单个菌落到5-12 mL的LB培养基(含适量抗生素),37oC震荡培养14-16小时(勿超过16小时)。室温下10,000 rpm离心1分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
  2. 加入450 µL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
  3. 加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转多次至溶液充分混匀,室温静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
  4. 加入550 µL Buffer N1, 立即反转多次,至溶液充分混匀,此时出现白色絮状沉淀。
  5. 将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中有白色沉淀,可再次离心)。
  6. 小心吸取700 µL离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中(避免吸起沉淀),室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“7”至全部上清离心过DNA柱。
  7. 可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。
  8. 向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer(确保已加入无水乙醇),室温下,13,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“8”。
  9. 将离心柱放回高速离心机中,13,000 rpm室温下开盖离心2分钟,以彻底去除残留的乙醇。
  10. 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中,向DNA柱的正中间加入100~150 µL(体积>100 µL)的ddH2O(pH在7.0-8.5之间)或Elution Buffer,室温放置2分钟,13,000 rpm 离心1分钟,洗脱质粒DNA。将洗脱液再加到柱的中间,13,000 rpm 离心1分钟,洗脱质粒DNA。

操作流程:





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