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商品编号:54037
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琼脂糖凝胶小量回收试剂盒(250preps)

价    格:1490.00

产    地:美国更新时间:2019/7/15 13:41:34

品    牌:Biomiga型    号:DC3511-02

状    态:正常点击量:1841

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上海妙骏生物科技有限公司

联 系 人:言国英

电     话:021-54461558

传     真:021-54461657

等     级: (第 10年)

性     质:生产型,

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产品说明:

本试剂盒可以简单、快速、高效的从琼脂糖凝胶或PCR反应产物中回收DNA片段,有效纯化长度在100bp-20kb的片段,回收率高达80-90%。

保存条件:

Buffer GC应避光保存,其他组分室温保存。

使用前请注意:
 
  使用前请分别在DNA Wash Buffer中加入8 mL (DC3511/DC3514-00) 或者60 mL(DC3511/DC3514-01) 或者96 mL (DC3511/DC3514-02) 或者60 mL (DC3511/DC3514-03) 100% 乙醇。
  溶解100 mg的琼脂糖凝胶,约需要100 µL Buffer GC。
  溶胶液GC 在较低温度下易沉淀,若温度较低,出现沉淀,使用前请在37 oC加热几分钟,至沉淀溶解后再使用。
  本试剂盒所有操作步骤均在室温下进行。
 
用户自备材料:
 
  100% 乙醇
  台面离心机和1.5 mL 微型离心管
  55-60 oC 水浴(胶回收时用)
  真空装置(真空步骤时用)
  小于200 bp的片段的可加异丙醇。
 
PCR产物纯化/胶回收离心法操作步骤:
 
1. PCR产物纯化:在1倍体积的PCR反应物中加入2倍体积的 Buffer GC,涡旋充分混匀。对小于200 bp的PCR产物,加入5倍体积的Buffer GC。
 
胶回收:将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下,转至1.5 mL离心管中,再加入1倍体积的Buffer GC (100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60 oC下培育8分钟左右,且每隔2分种轻弹试管底部,直至胶溶解完全,放置使其冷却至室温。
 
建议: 
 为取得最好的实验结果,请使用新鲜配制的电泳缓冲液制胶和电泳。
 切胶时,尽量缩短在紫外灯下照射的时间,以减少紫外对DNA的损伤,并尽量切除不含DNA的凝胶。
 若DNA片段小于200 bp,请加入1体积的异丙醇。
 
2. 转移700 µL DNA/Buffer GC 混合溶液至离心柱中,室温下,13,000 x g下离心1分种,弃废液,将离心柱放回收集管中。重复此步使剩余的溶液通过柱子。
 
3. 加入300 µL of Buffer GC到离心柱中,室温下13,000 x g离心30-60 秒,弃废液。
 
4. 加入650 µL DNA Wash Buffer (确保已将乙醇按说明书要求加入DNA Wash Buffer中),室温下在13,000 x g下离心30秒,弃废液。重复步骤4。
 
4. 13,000 x g开盖再次离心3分钟,以去除柱中残余的乙醇。
注意:此步操作对DNA的产率多少极为关键。
 
5. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中,向柱中加入在60oC 下预热的30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分钟。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。将洗脱液重新上柱,再次离心洗脱。
 
建议: 将洗脱缓冲液预热到65 oC,加洗脱液后将柱子整个温育5分钟后再离心洗脱可以增加DNA回收效率。
对大于8kb的片段,加洗脱液后将柱子整个温育15-30分钟可以提高回收效率。
 
PCR产物纯化/胶回收真空/离心法操作步骤
 
 
1. 将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下,转至1.5 mL离心管中,再加入1倍体积的Buffer GC(100 mg的凝胶加入100 µL Buffer GC)。在55-60oC下培育8分钟左右,且每隔2分种轻弹试管底部,直至胶溶解完全,放置使其冷却至室温。
 
2. 准备真空装置,将柱子与歧管连接。
 
3. 将 DNA/Buffer GC 混合溶液转移至离心柱。
 
4. 打开真空装置,溶液流下。
 
5. 加入650 µL的DNA Wash Buffer漂洗离心柱。
 
6. 重复步骤5。再真空抽2分种。
 
7. 将柱子放入收集管,开盖在最高速离心2分种以除去乙醇。
 
8. 将柱子放入干净的1.5 mL试管中,向柱中加入30-50 µL Elution Buffer或ddH2O。在室温下放置1分种。13,000 x g 离心1分种以洗脱DNA。




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