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海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒（50次）

产品组分

•  裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

•  漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

产品说明

本产品用于多种动物组织（新鲜或冻存）与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。已成功提取鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物组织基因组DNA。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀ = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

产品特点

• 高效：一次可获得3-35μg基因组DNA。
• 快速：30min内即可获得超纯的基因组DNA。
• 通用：可从多种样本材料中获得基因组DNA。
• 安全：整个操作中不用酚/氯仿有机物。
• 高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。

海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒（50次）

产品用途

• 常规限制性酶切
• PCR扩增
• 文库构建
• 分子标记分析

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  材料处理

取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组织材料含量应不超过10 mg。

如果没有液氮，尽快将组织切小置于离心管，进入下一步。

● 每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10μg基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组DNA的得率与纯度。

2  加入200 μl消化缓冲液DS，漩涡振荡15 s。

● 如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml），振荡混匀，室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K，漩涡振荡混匀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。55℃温浴至溶液变清亮（期间可适当颠倒几次，温浴后简短离心以去除管盖内壁的水

珠）。

4  加入220 μl裂解液MS充分颠倒混匀，65℃温浴10 min，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。       

5  加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min，

弃滤液。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

6  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。

7  加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

8  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。 12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 60℃预热，会提高基因组DNA的产量。