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海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒（50次）

海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒

产品组分

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于海洋动物全血/体液样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组

DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于鱼类、虾类、贝类动物全血，一次可从20 μl全血

中提取到3-10 μg高纯度基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀ =1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

海洋动物血液基因组DNA提取试剂盒（50次）

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

预备实验：

取血液/体液样本在红细胞计数板进行细胞计数，计算其细胞数量级10^x/ml，（7-x）ml就是提取基因组DNA所需的血液体积数。

1  取血液/体液样本（7-x）ml加入到一只1.5 ml离心管中，5,000 rpm离心3min，弃上清，收集沉淀。

● 如果样本超过1.5ml，可分次加入，离心收集沉淀，务必使离心所得的沉淀中包含10⁵-10⁶的细胞数。

2  加入200靗消化缓冲液DS，旋涡振荡直至完全分散。

● 如需去除RNA，加入消化缓冲液DS后，再加入4靗 RNase A（100 mg/ml）溶液，震荡混匀，室温放置5min。

3  加入20靗蛋白酶K和220靗裂解液MS，漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，

● 可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 纯度降低。

4  加入220靗无水乙醇，上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5  加入500靗去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。

6  加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

7  加入500靗漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

9  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100靗纯化液TE。室温放置2min。

10  12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 纯化液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

● 对纯化液TE 进行60℃预热，会提高基因组DNA的产量。