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商品编号:67189
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Quick血液基因组DNA提取试剂盒(50次)

价    格:440

产    地:广东更新时间:2021/9/10 14:45:14

品    牌:东盛生物型    号:(50次)

状    态:正常点击量:1504

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广州东盛生物科技有限公司

联 系 人:张俊杰

电     话:020-87791356

传     真:020-87791381

等     级: (第 8年)

性     质:生产型,贸易型,

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Quick血液基因组DNA提取试剂盒(50次)

Quick血液基因组DNA提取试剂盒

 


货号

规格

价格

N1131

50次

440

N1132

100次

785


 

产品组分


组分

货号

N1131

N1132

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液QS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

说明书

1份

1份


注: 裂解液QS中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

          漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

 

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

消化缓冲液DS如有沉淀,在55℃加热溶解。待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

 

产品说明

本产品可直接用于全血样本的基因组DNA的快速纯化。与传统的血液基因组DNA纯化试剂盒相比,本产品无须去除血液中的红细胞,可直接裂解全血纯化基因

DNA,从而更加便捷、高效。其纯化原理是利用独特的细胞裂解液直接裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系中的基因组DNA,经蛋白酶消化、

漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。

本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗凝剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。可从少于220 μl全血中提取到5μg高纯度基因组DNA(OD260/OD280

 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

 

产品特点

  • 快速:30min内即可获得超纯的基因组DNA。
  • 便捷:无须去除红细胞,直接裂解血细胞纯化基因组DNA。实验操作更加简单。
  • 高效:一次可获得5 μg基因组DNA。
  • 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
  • 高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。

 

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 文库构建
  • Southern 杂交
  • 分子标记分析




产品介绍

Quick血液基因组DNA提取试剂盒(50次)

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

 

Quick血液基因组DNA提取流程图

图1  Quick血液基因组DNA纯化流程图

 

操作方法

1  取全血样品,每220 μl加入到一只1.5 ml离心管内。如果不足220 μl可用缓冲液DS补足。

   注:对于哺乳动物全血,每200 μl全血中可提取1.5-5 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超

过20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。

          如需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液,震荡混匀,室温放置5min。

2  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液QS。 65℃温浴10-15min。溶液应呈黑色。简短离心以去除管盖内壁的水珠。

3  加入220 μl无水乙醇,上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

    注:此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

4  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA。

5  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

    注:漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

6  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

7  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

8   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100 μl纯化液TE。室温放置2min。

9  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度血液基因组DNA。-20℃保存。

   注:洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。对洗脱液TE 60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

 

图2  血液基因组DNA电泳图

 

注意事项

1  柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素队酶促反应有可能起阻害作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

2  基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

3  基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

 

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

度。

2  DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3 OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用纯化液TE,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 




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