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商品编号:66479
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血液基因组DNA大量提取试剂盒(10次)

价    格:880

产    地:广东更新时间:2021/9/10 14:45:14

品    牌:东盛生物型    号:(10次)

状    态:正常点击量:1263

18318023469
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广州东盛生物科技有限公司

联 系 人:张俊杰

电     话:020-87791356

传     真:020-87791381

等     级: (第 8年)

性     质:生产型,贸易型,

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本产品可以通过QQ或者电话沟通询问,可以免费提供试用装与技术服务,解决您的后顾之忧。
血液基因组DNA大量提取试剂盒(10次)

血液基因组DNA大量提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)

货号

规格

价格

N1123

10次

880

N1124

50次

3900

产品组分

组分

N1123

N1124

红细胞裂解液RS

200 ml

500 ml×2

消化缓冲液DS

75 ml

400 ml

裂解液MS

100 ml

500 ml

蛋白酶K

5 ml

25 ml

去蛋白液PS

150 ml

400 ml×2

漂洗液PE

75 ml

100 ml×4

纯化液TE

20 ml

100 ml

DNA纯化柱

10个

50个

说明书

1份

1份

● 裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*,细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。一次可从5-10 ml全血中提取到30-200 μg高纯度基因组DNA(OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接于PCR、酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA,要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA,建议选择Quick血液基因DNA提取试剂盒(东盛货号:N1131、N1132)。

产品特点

  • 高效:一次可获得30-200μg基因组DNA。

  • 高纯度;无须再纯化即可直接用于下游实验。

  • 安全;整个操作过程中不用酚/氯仿有机物。

产品用途




产品介绍

血液基因组DNA大量提取试剂盒(10次)

产品用途

  • 常规限制性酶切

  • PCR扩增

  • 文库构建

  • Southern杂交

  • 分子标记分析

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中沉淀,可在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  取血液样本,每5-10 ml血液加入到一只50 ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min,弃上清,

收集白色或淡红色沉淀,重复上诉步骤。

● 如沉淀仍然呈深红色,表明红细胞裂解不充分,可再加等体积红细胞裂解液RS处理一次。

● 对于哺乳动物全血,每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超过

500 μl/离心管。每500 μl全血中可提取200 μg的基因组DNA。

2  加入5 ml消化缓冲液DS,漩涡振荡至形成完全均一的悬浮液。

● 如需去除RNA,可加入100 μl RNase A(100 mg/ml),振荡15秒,室温放置5min。

3  加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS,漩涡振荡混匀。65℃温浴15 min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。

4  加入5.5 ml无水乙醇,上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心

1min,弃滤液。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5  加入10 ml去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA。

6  加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

7  加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

9  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。

10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

注意事项

  • 柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

  • 基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

  • 基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。




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