稀释液的准备：         

1.先把犬冻精生产用的A和B液回暖到室温；

2.按体积的20%，加新鲜蛋黄到A液体和B液中（比如4毫升蛋黄到20毫升瓶的A液；2毫升蛋黄到10毫升瓶的B液）；

3.手摇把内含液混匀；

4.把A液保存在室温，用于步骤1；

5.把B液瓶冷却到+4°C，用于步骤2；

6.只用富含精子的精液部分来生产冻精。

冲洗：

1.如果收集的精液混有前列腺液，先按1份原精加3-5份A液稀释，然后在700g重力下离心10-15分钟；

2.丢弃上清液；

3.小心缓慢地用A恢复到富含精子的体积（根据以往经验，2-3毫升），混匀（重组精液）。

冷冻操作：

步骤1：＊对每份原精（或重组精液），对等缓慢加1份A液，降温到+4°C。

       ＊通常保存在+4°C至少两个小时。

步骤2：＊对+4°C保存后的混合精液，用1到3分钟慢慢加B液（也在+4°C），加入B液的量同原始富含精子的体枳相等。

       ＊在+4°C下填充预冷却的细管并封口。

       ＊继续在+4°C保存60分钟。

       ＊把细管放在液氮面上方5厘米处至少20分钟后再整个沉浸到液氮中。

解冻：

1.细管在+38°C解冻1分钟；

2.把解冻的精液合并到一试管中，添加等量事先预温到+38°C精液。

3.立即做子宫内或开腔犬人工授精。

蛋黄的准备和添加：

1.把新鲜鸡蛋用70％酒精洗净，晾干；

2.打开鸡蛋，保持卵黄膜不破；

3.分离卵黃与蛋清；

4.把蛋黄在干净无绒的纸巾上滚动，黏走最后的蛋白；

5.用干净的针筒把蛋黄吸到无菌的烧杯里，丢弃蛋黄膜；

6.用校准过的针筒或移液枪加定量的蛋黃到稀释液。

包括：水，柠檬酸纳，TRIS，葡萄糖，甘油，柠懞酸，MOFA专有护精因子和庆大霉素；

保存：冷藏于+2°C到+8°C。用无菌方法从小瓶拿出稀释液。过期作废。

注意：防止儿童接触。不可人和动物食用，药用和临床用，不能注射用。

稀释液的准备：         

1.先把犬冻精生产用的A和B液回暖到室温；

2.按体积的20%，加新鲜蛋黄到A液体和B液中（比如4毫升蛋黄到20毫升瓶的A液；2毫升蛋黄到10毫升瓶的B液）；

3.手摇把内含液混匀；

4.把A液保存在室温，用于步骤1；

5.把B液瓶冷却到+4°C，用于步骤2；

6.只用富含精子的精液部分来生产冻精。

冲洗：

1.如果收集的精液混有前列腺液，先按1份原精加3-5份A液稀释，然后在700g重力下离心10-15分钟；

2.丢弃上清液；

3.小心缓慢地用A恢复到富含精子的体积（根据以往经验，2-3毫升），混匀（重组精液）。

冷冻操作：

步骤1：＊对每份原精（或重组精液），对等缓慢加1份A液，降温到+4°C。

       ＊通常保存在+4°C至少两个小时。

步骤2：＊对+4°C保存后的混合精液，用1到3分钟慢慢加B液（也在+4°C），加入B液的量同原始富含精子的体枳相等。

       ＊在+4°C下填充预冷却的细管并封口。

       ＊继续在+4°C保存60分钟。

       ＊把细管放在液氮面上方5厘米处至少20分钟后再整个沉浸到液氮中。

解冻：

1.细管在+38°C解冻1分钟；

2.把解冻的精液合并到一试管中，添加等量事先预温到+38°C精液。

3.立即做子宫内或开腔犬人工授精。

蛋黄的准备和添加：

1.把新鲜鸡蛋用70％酒精洗净，晾干；

2.打开鸡蛋，保持卵黄膜不破；

3.分离卵黃与蛋清；

4.把蛋黄在干净无绒的纸巾上滚动，黏走最后的蛋白；

5.用干净的针筒把蛋黄吸到无菌的烧杯里，丢弃蛋黄膜；

6.用校准过的针筒或移液枪加定量的蛋黃到稀释液。

包括：水，柠檬酸纳，TRIS，葡萄糖，甘油，柠懞酸，MOFA专有护精因子和庆大霉素；

保存：冷藏于+2°C到+8°C。用无菌方法从小瓶拿出稀释液。过期作废。

注意：防止儿童接触。不可人和动物食用，药用和临床用，不能注射用。