血球计数仪

血细胞分析仪亦称血球计数仪,说到血细胞自动化分析,就不得不提到“库尔特原理”,这是由WALLACE H. COULTER先生在1940年代创立的用电阻法检测悬液中颗粒数量和大小的方法

实现

在分析换能原理时,总是理想地让细胞一个个地通过宝石微孔。但是红、白细胞的直径一般是7-10μm,大者也只有20μm左右,而宝石微孔的孔径却为100μm。实际上会存在两个、三个甚至更多细胞,一同或前后尾随进入小孔“敏感区”的可能性,虽然这种情况产生的脉冲幅度比单个细胞要高,但它只能产生一个信号脉冲,使计数有所丢失。这种现象称为重合损失。为了弥补这种损失,电路中设有重合校正电路或用软件校正。重合损失通常都是按泊桑(Poisson)分布规律加以校正的,校正规律是:计数值在8000以下时不校正。计数值在8000-38000时,每计数1000个含补充的100个数。即在这个范围内,计数电路每计900个便向千位进1。在38000以上时,每计数1000含补充的200个。即在38000以上,计数器每计数800个向千位进l。经重合校正后,计数结果接近实际值。

原理

血细胞是电的不良导体,将血细胞置于电解液中,由于细胞很小,一般不会影响电解液的导通程度。但是如果构成电路的某一小段电解液截面很小,其尺度可与细胞直径相比拟,那么当有细胞浮游到此时,将明显增大整段电解液的等效电阻。如果该电解液外接恒流源(不论负载阻值如何改变,均提供恒定不变的电流),则此时电解液中两极间的电压是增大的,产生的电压脉冲信号与血细胞的电阻率成正比。如果控制定量溶有血细胞的电解溶液,使其从小截面通过,也即使血细胞顺序通过小截面,则可得到一连串脉冲,对这些脉冲计数,就可求得血细胞数量。由于各种血细胞直径不同,所以其电阻率也不同,所测得的脉冲幅度也不同,根据这一特点就可以对各种血细胞进行分类计数。这就是变阻脉冲法原理。


特性

变阻法计数在大多数细胞计数器中是利用小孔管换能器装置实现的。
在仪器的取样杯内装有一根吸样管,吸样管下部开有一个小孔(宝石制作),因此也叫做小孔管。小孔管内外各置一只铂金电极,两电极间施加一个恒定的电流。测试时,先将待测血液用洁净的电解液充分稀释,使血细胞在电解液中成为游散状态,然后在小孔管上端施以负压,在负压的抽吸下,混有血细胞的电解液便被均匀地抽进小孔管。当血细胞通过小孔时,排开了等体积的电解液,使电解液的等效电阻瞬间变大,这个变大的电阻在恒流源的作用下引起一个等比例增大的电压。当细胞离开小孔附近后,电解液的等效阻值又恢复正常,直到下一个细胞到达小孔。这样血细胞连续地通过小孔,就在电极两端产生一连串电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞个数相当,脉冲的幅度与细胞体积成正比。