spe技术在中草药（黄芪）残留分析中的应用

黄芪为常用中草药，具有较高的药用价值，其主要成分黄芪甲苷具有镇痛、镇静和降血压等药理活性［1，2］。2005年版《中国药典》规定采用HPLCELSE方法测定黄芪甲苷含量［3］，鉴于紫外检测器的普及性，目前相当部分实验室仍采用HPLC-UV法分析黄芪及相关制剂中黄芪甲苷含量［4～8］。网校由于黄芪甲苷的特征吸收波长在200 nm左右， 样品中杂质对黄芪甲苷定量分析干扰较大。目前一般采用D101大孔吸附树脂处理样品，样品中仍含有较多的杂质，黄芪甲苷与其它杂质难以达到基线分离，影响分析准确度，另一方面也不利于色谱柱的保护。本文采用固相萃取方法纯化样品中黄芪甲苷，可明显去除样品中杂质，并以此测定了黄芪药材中黄芪甲苷含量。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；C18固相萃取柱（美国Bestown公司）；Laborota 4000 旋转蒸发器（德国Heidolph公司）；BS124 S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ500DB超声波清洗机（昆山超声仪器厂）。 　　1.2 药材与试剂　黄芪购于南宁市一心药业公司，经鉴定均为药典正品；黄芪甲苷对照品购于中国药品与生物制品检定所（批号0781200311）；乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，双蒸水自制。 　　2 方法 　　2.1 对照品溶液的配制精密称取17.6 mg黄芪甲苷对照品置于25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。 　　2.2 黄芪甲苷供试品溶液的制备　取黄芪药材，粉碎。精密称取4 g粉末，用20 ml甲醇于索氏提取器中浸泡过夜，加甲醇至60 ml，于水浴中80℃下回流提取4 h。提取液挥干甲醇，残渣用正丁醇饱和的水10 ml超声溶解，溶液用水饱和的正丁醇萃取4次，40 ml/次。合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，40 ml/次，然后用正丁醇饱和水洗至中性，回收正丁醇，残渣用5 ml水溶解，备用。C18固相萃取柱依次用5 ml甲醇和5 ml水预处理，取黄芪甲苷水溶液过固相萃取柱，课堂先用3 ml双蒸水洗涤，然后用20%甲醇溶液5 ml洗涤，弃去洗涤液。用60%甲醇20 ml洗脱，收集洗脱液。洗脱液挥干溶剂，用甲醇定容至5 ml作为供试品溶液。 　　2.3 色谱条件Zorbax SBC18色谱柱 (4.6 mm×150 mm,5 μm)，流动相为乙腈水（32∶68，v/v），流速1.0 ml/min，柱温为30℃，检测波长200 nm。样品谱图见图1，对照品谱图见图2。 　　2.4 样品含量测定 2.4.1 线性范围考察用微量进样器分别取2，4，6，8，10 μl黄芪甲苷对照品溶液进样。以黄芪甲苷对照品峰面积为纵坐标y，黄芪甲苷对照品进样量为横坐标x，进行线性回归，得回归方程：y=72.288 5 x-4.902 5 (n=5)，r=0.999 9，线性范围为1.408～7.04 μg。 固相萃取技术在兽药残留分析中的应用* 祝伟霞1，杨冀州2* (1.郑州大学化学系，河南郑州 450001；2.河南出入境检验检疫局